Какие существуют методы экстракции нуклеиновых кислот?
Принцип экстракции нуклеиновых кислот, во-первых, гарантирует целостность первичной структуры нуклеиновой кислоты, а во-вторых, исключает загрязнение других молекул. При экстракции следует обращать внимание на сокращение времени экстракции, уменьшение разложения нуклеиновой кислоты химическими и физическими факторами, механическим усилием сдвига и высокой температурой, а также предотвращение биологической деградации нуклеиновой кислоты. Какие есть методы экстракции нуклеиновых кислот?
1. концентрированный солевой метод
(1). Используя различную растворимость RNP и DNP в электролитическом растворе для разделения этих двух веществ, общий метод состоит в извлечении слизи DNP, полученной путем экстракции хлорида натрия 1М хлоридом натрия и встряхивания вместе с хлороформом, содержащим небольшое количество октанола, для эмульгирования. и центрифугирование для удаления белка. В это время протеиновый гель остается между водной фазой и фазой хлороформа, в то время как ДНК находится в верхней водной фазе. Натриевая соль ДНК может быть осаждена 2-кратным объемом 95% этанола.
(2). Вы также можете использовать 0,15 M NaCL для многократной промывки раствора для дробления клеток для удаления RNP, затем экстрагировать дезоксирибонуклеин с помощью 1 M NaCL, а затем удалить белок методом хлороформ-изоалкоголь. Сравнивая эти два метода, второй метод может уменьшить деградацию нуклеиновой кислоты.
(3). При извлечении ДНК разбавленным раствором соляной кислоты добавление соответствующего количества детергента, такого как SDS, может помочь отделить белок от ДНК. В процессе экстракции, чтобы ингибировать деградацию ДНК ДНКазой в ткани, цитрат натрия был добавлен к раствору хлорида натрия в качестве агента плавления для ионов металлов, обычно 15 М NaCL, 0,015 М цитрата натрия, и так называемый раствор SSC. для извлечения ДНК.
2. метод анионного моющего средства
Детергенты, такие как SDS или ксилат натрия, используются для денатурирования белков, а ДНК можно экстрагировать непосредственно из биологических материалов. Поскольку ДНК и белок в клетках часто объединяются электростатическим притяжением или координационными связями, анионные детергенты могут это разрушить. Своеобразная валентная связь, поэтому для извлечения ДНК часто используются анионные детергенты.
3. метод экстракции фенола
Фенол действует как денатурант белка и в то же время ингибирует деградацию ДНКазы. Когда гомогенат обрабатывают фенолом, связь между белком и ДНК разрывается, и поверхность молекулы белка содержит много полярных групп, совместимых с фенолом, и молекула белка растворима в феноле. Фаза, при этом ДНК растворима в водной фазе. После центрифугирования и наслаивания удалите водный слой, повторите операцию несколько раз, а затем объедините ДНК-содержащую водную фазу и используйте свойство нерастворимой в спирте нуклеиновой кислоты для осаждения ДНК этанолом. В настоящее время ДНК представляет собой очень вязкое вещество, и ее можно извлечь, обернув ее в шар со стеклом. Особенностью этого метода является сохранение извлеченной ДНК в ее естественном состоянии.
4. метод водной экстракции.
Используя природу нуклеиновой кислоты для растворения в воде, после разрушения тканевых клеток удалите РНК с помощью раствора с низким содержанием соли и растворите осадок в воде, чтобы полностью растворить ДНК в воде. После центрифугирования соберите супернатант и добавьте к супернатанту твердый хлорид натрия. К 2,6 М добавляют в 2 раза больше 95% этанола, немедленно перемешивают, а затем промывают 66%, 80% и 95% этанолом и ацетоном соответственно.
Вышеупомянутое дает краткое введение в методы экстракции нуклеиновых кислот. Ascend предоставляет профессиональные и комплексные услуги по отливке продуктов экстракции нуклеиновых кислот.
