Какие факторы влияют на экстракцию нуклеиновых кислот с помощью магнитных шариков?

В последние два года, когда обнаружение патогенов стало более популярным, обнаружение патогенных нуклеиновых кислот постепенно вошло в поле зрения людей и стало золотым стандартом для обнаружения патогенов. Столкнувшись с большим количеством образцов, результаты тестирования должны быть опубликованы в короткие сроки, а потребности людей в быстрых и эффективных методах тестирования становятся все более и более насущными. Как важный этап обнаружения нуклеиновых кислот, экстракция нуклеиновых кислот также требует пропускной способности и высокой эффективности. Автоматическая экстракция нуклеиновых кислот (экстракция нуклеиновых кислот методом магнитных шариков) быстро получила широкое распространение и применение благодаря своим быстрым, эффективным, простым в использовании, безопасным и нетоксичным характеристикам, и стала стандартом в лабораториях. Однако во время процесса экстракции определенные факторы будут влиять на результаты экстракции и требуют внимания оператора. Редактор Aisen собрал соответствующие знания о факторах, влияющих на экстракцию нуклеиновых кислот методом магнитных шариков, и давайте поделимся ими с вами.

Экстракция нуклеиновых кислот методом магнитных гранул состоит из этапов лизиса, промывки и элюирования. Факторы, влияющие на эти шаги, также повлияют на эффективность извлечения магнитных шариков. Ниже мы объясняем каждый шаг один за другим.

Факторы, влияющие на стадию лизиса

1. Состав лизирующего раствора

Для некоторых образцов, которые трудно лизировать, способность лизата к лизису может быть увеличена путем увеличения концентрации соли гуанидина и поверхностно-активного вещества. Соли гуанидина и поверхностно-активные вещества могут способствовать денатурации белков, разрушать клеточные мембраны, диссоциировать нуклеиновые кислоты и белки и высвобождать больше нуклеиновых кислот.

2, температура и время пиролиза

Повышение температуры и увеличение времени лизиса может сделать лизис клетки более тщательным и получить больше нуклеиновых кислот. Вам необходимо изучить подходящую температуру и время; слишком высокая температура или слишком долгое время также могут привести к фрагментации нуклеиновой кислоты или снижению эффективности экстракции, вызванной улетучиванием спирта.

3, адсорбционная способность магнитных шариков

Магнитные шарики серии извлечения магнитных шариков, как правило, представляют собой силанольные магнитные шарики, и на адсорбционную способность магнитных шариков влияет удельная площадь поверхности магнитных шариков и плотность модифицированной группы. Обычно выбираются магнитные шарики с более модифицированными группами и большей удельной поверхностью. Как правило, чем меньше диаметр частиц магнитных шариков, тем больше удельная поверхность. Но дело не в том, что чем меньше размер частиц магнитных шариков, тем лучше, чем меньше размер частиц магнитных шариков, скорость адсорбции также замедляется, вы можете выбирать в соответствии с фактической ситуацией с образцом. Связывающий буфер обычно комбинируют с изопропанолом или этанолом. Как правило, связывающая способность может быть увеличена за счет увеличения доли спирта, а концентрация хаотропной соли должна быть увеличена, чтобы способствовать связыванию нуклеиновой кислоты и магнитных шариков.

Факторы, влияющие на этапы стирки

Промывание очень важно на всем этапе экстракции. Это связано с чистотой нуклеиновой кислоты, которая напрямую влияет на последующие приложения ПЦР. Амплитуда колебаний и время перемешивания магнитного стержня влияют на эффективность стирки.

1 , Амплитуда колебаний магнитного стержня

Если амплитуда колебаний магнитного стержня слишком мала, на магнитных шариках останутся примеси, которые повлияют на способность магнитных шариков адсорбировать нуклеиновые кислоты; если колебание слишком сильное, часть нуклеиновой кислоты будет потеряна, или нуклеиновая кислота будет разрушена или разложена, и выход будет уменьшаться.

2, время смешивания

Если время перемешивания слишком короткое, на магнитных шариках останутся примеси, которые повлияют на способность магнитных шариков адсорбировать нуклеиновые кислоты; если время перемешивания слишком велико, часть нуклеиновой кислоты будет потеряна, или нуклеиновая кислота будет разрушена или разложена, и выход снизится.

Влияние факторов стадии элюирования

Стадия элюирования напрямую влияет на выход нуклеиновой кислоты. Факторами, влияющими на эффективность элюирования, являются степень сушки магнитных шариков, а также температура и время элюирования.

1. Степень сухости магнитных шариков.

Если магнитные шарики не полностью высохли, в них могут быть примеси, такие как спирт, которые повлияют на последующую реакцию ПЦР; если магнитные шарики слишком сухие,

нуклеиновая кислота может высохнуть на магнитных шариках, что приведет к снижению эффективности элюирования.

2, температура и время элюирования

Соответствующее увеличение температуры и времени элюирования поможет высвободить нуклеиновую кислоту из магнитных шариков. Если время слишком велико или температура слишком высока, нуклеиновая кислота может разлагаться, и необходимо соблюдать баланс.

Соответствующее содержание о факторах, влияющих на метод экстракции нуклеиновых кислот с помощью магнитных шариков, приведено выше. При проведении экстракции нуклеиновой кислоты методом магнитных гранул убедитесь, что указанные выше факторы являются разумными, чтобы качество экстракции могло быть лучше. Aisen Biotechnology имеет обширный опыт в производстве систем экстракции нуклеиновых кислот и наборов для экстракции нуклеиновых кислот. В нем используются высококачественные технологии и надежное качество. Нуждающиеся клиенты могут позвонить для консультации.