Как повысить точность тестирования нуклеиновых кислот COVID-19?
С возобновлением эпидемии COVID-19 потребность в тестировании нуклеиновых кислот резко возросла. Однако точность результатов тестирования нуклеиновых кислот привлекает широкое внимание. Ситуация «пропавших без вести» заставила некоторых клиницистов и общественность задавать вопросы о качестве тестовых наборов. сомневаться. Итак, какие факторы могут повлиять на текущую точность обнаружения нуклеиновых кислот? Как профессиональный поставщик наборов для экстракции нуклеиновых кислот, Ascent рассказала нам, как повысить точность обнаружения нуклеиновых кислот COVID-19 при сборе образцов, хранении и транспортировке образцов, экстракции нуклеиновых кислот и тестировании амплификации.
1. Сбор образцов
Правильный отбор проб — ключ к успеху эксперимента. Понятно, что из-за ограничения маневренности наиболее распространенным методом отбора проб является использование мазков из носоглотки, мокроты или жидкости для альвеолярного лаважа. Самый распространенный метод — это забор мазков из носоглотки. Однако метод взятия мазка из носоглотки влияет на точность теста. Лучше всего, чтобы у пациента была опытная медсестра. Необходимо собрать достаточно эффективных клеток из носоглотки пациента. Неопытные медсестры могут быть не в состоянии получить квалифицированные образцы. .
Кроме того, мазки из носоглотки и консервационные растворы, используемые для сбора образцов, также влияют на качество и сохранность собранных образцов. Рекомендуется использовать стерильные флокированные тампоны, которые могут поглощать и выделять больше образцов и не содержат свободной ДНК. Раствор фермента и РНКазы для сохранения клеток может лучше сохранить вирусную нуклеиновую кислоту и избежать деградации РНК COVID-19.
2. Хранение и транспортировка образцов.
COVID-19 — это РНК-вирус. Особое внимание следует уделять температуре хранения и соответствующей продолжительности хранения и транспортировки образцов, чтобы избежать деградации нуклеиновых кислот и получения ложноотрицательных результатов. Образцы должны быть отправлены для проверки как можно скорее после сбора и отправлены в лабораторию в течение 2–4 часов после сбора. Образцы крови следует транспортировать при комнатной температуре, а другие образцы — при температуре от 2 ° C до 8 ° C; если время транспортировки превышает 24 часа, образцы следует хранить при температуре -70 ° C или ниже, а транспортировка на короткие расстояния должна осуществляться при температуре от 2 ° C до 8 ° C. Для перевозки на дальние расстояния следует использовать транспортировку сухим льдом. Избегайте многократного замораживания и оттаивания во время транспортировки и хранения образцов.
3. Экстракция нуклеиновой кислоты
Тестирование нуклеиновых кислот предъявляет высокие требования к лабораториям, оборудованию, персоналу и реагентам. Необходимы специальные лабораторные перегородки для ПЦР, чтобы гарантировать точность результатов теста. Экстракция нуклеиновой кислоты является важным этапом обнаружения нуклеиновой кислоты.
В настоящее время утвержденный набор содержит только реагенты для амплификации, необходимые для обнаружения нуклеиновых кислот COVID-19, и не содержит реагентов для экстракции нуклеиновых кислот. Могут быть различия в эффективности экстракции различных реагентов для экстракции нуклеиновых кислот или систем экстракции нуклеиновых кислот. Рекомендуется использовать проверенные методы экстракции и экстракционные реагенты для экстракции нуклеиновых кислот, чтобы обеспечить точность результатов теста.
Чтобы обеспечить безопасность инспекторов, а также чистоту и эффективность экстракции нуклеиновых кислот, можно использовать автоматизированный метод экстракции нуклеиновых кислот, основанный на адсорбции магнитных гранул. Многие авторитетные лаборатории и соответствующие эксперты рекомендуют использовать малогабаритный полуавтоматический прибор для экстракции нуклеиновых кислот, поместить его в шкаф биологической безопасности и выполнить все этапы загрузки образца и экстракции нуклеиновой кислоты в шкафу безопасности, что является простым и эффективным. , и защищает безопасность операторов.
4. Обнаружение усиления
Обнаружение нуклеиновых кислот COVID-19 в основном нацелено на открытую рамку считывания 1ab (ORF1ab), белок нуклеокапсида (N) и белок оболочки (E) генома COVID-19. Чтобы подтвердить, что случай положительный в лаборатории, выполняются следующие условия: три мишени (ORF1ab, N, E), специфические результаты флуоресцентного анализа RT-PCR в реальном времени в одном и том же образце более двух (включая два) положительных. Если есть положительный результат теста для одной цели, требуется повторный отбор проб и повторное тестирование.
Отрицательные результаты не могут исключить новые инфекции COVID-19. Необходимо исключить факторы, которые могут давать ложноотрицательные результаты, в том числе: низкое качество образцов, таких как респираторные образцы из ротоглотки и других частей; образцы собраны слишком рано или слишком поздно; ненадлежащее хранение, транспортировка и обработка образцов; причины самой технологии, такие как ингибирование ПЦР и т. д.
В связи с серьезным распространением эпидемии разработка наборов для обнаружения нуклеиновых кислот COVID-19 и получение разрешения на экстренную помощь являются неотложными. На ранней стадии может быть недостаточно данных проверки клинических образцов, и существует риск недостаточной чувствительности и оптимизации специфичности. Характеристики реагентов и процент положительного обнаружения у разных производителей различаются. Большинство наборов обнаруживают только две мишени — ORF1ab и N-ген, а положительные результаты по одной мишени для некоторых реагентов составляют более 20% положительных результатов. Для положительных результатов с одной целью и подозрительных результатов рекомендуется использовать разные наборы для проверки или отправить CDC для подтверждения, но это увеличит рабочую нагрузку и задержит время диагностики. Из общедоступной информации, в настоящее время одобренные реагенты не содержат фермент UNG и систему защиты от загрязнения dUTP, и существуют риски заражения и ложных срабатываний.
