Как проходит тестирование нуклеиновой кислоты COVID-19?

В последнее время, когда штамм COVID-19 мутировал, его токсичность и инфекционность усилились, а глобальная эпидемическая ситуация стала чрезвычайно серьезной. Для предотвращения распространения вируса, помимо профилактики, важнее контролировать источник инфекции. Возможна проверка на нуклеиновую кислоту. Вирус, скрывающийся в организме человека, обнаруживается впервые. Тестирование нуклеиновых кислот предназначено для выяснения наличия нуклеиновых кислот чужеродных вирусов в респираторных образцах, крови или кале пациентов, чтобы определить, инфицированы ли они COVID-19. Следовательно, если тест на нуклеиновую кислоту дает «положительный результат», он может доказать наличие вируса в организме пациента.

После того, как COVID-19 заражает человеческий организм, он сначала размножается в дыхательной системе. Таким образом, нуклеиновая кислота вируса в мокроте и мазках из носоглотки может быть проверена, чтобы определить, инфицировано ли человеческое тело вирусом. Таким образом, положительный тест на нуклеиновую кислоту можно использовать как новый стандарт диагностики инфекции COVID-19.

Принципы обнаружения нуклеиновых кислот COVID-19

Наиболее распространенный метод определения конкретной последовательности COVID-19 — количественная флуоресцентная ПЦР (полимеразная цепная реакция). Поскольку матрица реакции ПЦР представляет собой только ДНК, нуклеиновая кислота (РНК) COVID-19 должна быть подвергнута обратной транскрипции в ДНК перед реакцией ПЦР. В реакционную систему ПЦР включены пара специфических праймеров и зонд Такмана. Зонд представляет собой специфическую олигонуклеотидную последовательность с репортерным флуорофором и флуорофором-гасителем, меченными на обоих концах. Когда зонд завершен, флуоресцентный сигнал, испускаемый репортерной группой, поглощается группой гасителя; если в реакционной системе присутствует целевая последовательность, зонд связывается с матрицей во время реакции ПЦР, и ДНК-полимераза использует экзонуклеазную активность фермента для переноса зонда по матрице. При ферментативном расщеплении и расщеплении репортерная группа отделяется от группы гашения и излучает флуоресценцию. Каждый раз, когда цепь ДНК амплифицируется, образуется флуоресцентная молекула. Флуоресцентный прибор для количественной ПЦР может контролировать, что количество циклов (значение Ct), при которых флуоресценция достигает заданного порога, связано с концентрацией вирусной нуклеиновой кислоты. Чем выше концентрация вирусной нуклеиновой кислоты, тем меньше значение Ct. Положительная оценка этого продукта будет зависеть от продуктов разных производителей, основанных на характеристиках их собственных продуктов.

Процесс обнаружения нуклеиновых кислот COVID-19

Для обнаружения нуклеиновых кислот COVID-19 сначала в соответствии с требованиями к образцам, указанными в инструкциях к набору для извлечения нуклеиновых кислот, собираются некоторые образцы. К обычным типам образцов относятся мазки из зева, мазки из носа, мокрота, жидкость бронхиального лаважа, жидкость альвеолярного лаважа и т. Д.

После получения образца пациента тест следует провести как можно скорее. Если образец, который необходимо транспортировать, не может быть протестирован немедленно, его следует упаковать при низкой температуре в соответствии с инструкциями и отправить в специальное испытательное агентство для тестирования. После получения образца испытательное учреждение должно провести экстракцию нуклеиновой кислоты на образце, а реагент для экстракции нуклеиновой кислоты должен использовать набор для экстракции нуклеиновой кислоты, указанный в руководстве по утвержденному продукту.

Вирусную РНК необходимо сначала подвергнуть обратной транскрипции в кДНК, а затем амплифицировать и протестировать. Для амплификации и детектирования ПЦР следует использовать флуоресцентный прибор количественной ПЦР, указанный в руководстве по утвержденному продукту. Значение Ct образца, полученного с помощью количественной флуоресцентной ПЦР, можно использовать для определения того, содержит ли образец пациента COVID-19.
В вышеупомянутом процессе сбор, хранение и транспортировка образцов, экстракция и обнаружение нуклеиновых кислот в образцах, а также интерпретация результатов должны выполняться в строгом соответствии с требованиями инструкций к набору.

«Ложноположительный» и «ложноотрицательный» при тестировании нуклеиновых кислот

«Ложноположительный» тест на нуклеиновую кислоту означает, что пациент не инфицирован новым коронавирусом, но тест на нуклеиновую кислоту дает положительный результат. Мы также познакомили вас с тем, как повысить точность теста на нуклеиновую кислоту COVID-19. Возникновение «ложноположительных результатов» обычно вызвано перекрестным заражением между образцами или лабораторным загрязнением нуклеиновой кислотой во время лабораторного тестирования. На техническом уровне, если лаборатория строго выполняет работу по контролю качества, появления «ложных срабатываний» можно эффективно избежать.

«Ложноотрицательный» тест на нуклеиновую кислоту означает, что клинические симптомы пациента, результаты визуализации легких и даже эпидемиологический анамнез подтверждают наличие новой коронарной пневмонии, но результат теста на вирусную нуклеиновую кислоту у пациента «отрицательный», и результат теста не соответствует клинический.

Обычные причины «ложноотрицательных результатов»:

(1) На начальной стадии проникновения вируса в организм человека количество вируса в организме человека еще не достигло обнаруживаемого уровня. В разные периоды инкубации вируса, легких и тяжелых симптомов вирусная нагрузка на разные части человеческого тела (например, носоглотку, ротоглотку, трахею, бронхи и альвеолы) будет различаться. Следовательно, разные сроки отбора проб и места отбора проб могут привести к недостаточному количеству вируса в собранных образцах;

(2) Любой тестовый реагент имеет свой нижний предел обнаружения (т. Е. Чувствительность). Если вирус в образце пациента не достигает нижнего предела обнаружения используемого реагента, произойдет ложноотрицательный результат;

(3) Плохая работа лабораторного оборудования и персонала, плохое управление качеством и т. Д. Также приводят к «ложноотрицательным результатам»;

(4) Нерегулярный отбор проб, неправильное место сбора и атипичный сбор образцов привели к тому, что в образцах было слишком мало или совсем не было инфицированных вирусом клеток. Это может вызвать «ложноотрицательные результаты».

Вышеизложенное представляет собой введение в современные принципы и процедуры обнаружения нуклеиновых кислот COVID-19. Есть надежда, что источник инфекции можно будет в максимальной степени контролировать с помощью обнаружения нуклеиновых кислот и как можно скорее будет найден метод подавления вируса.