Cómo elegir el sistema de extracción de ácido nucleico adecuado

El sistema de extracción de ácidos nucleicos es un instrumento que completa automáticamente el trabajo de extracción de ácidos nucleicos de las muestras mediante la aplicación de reactivos de extracción de ácidos nucleicos coincidentes. Es ampliamente utilizado en varios campos, como el Centro para el Control de Enfermedades, el diagnóstico clínico de enfermedades, la seguridad de las transfusiones de sangre, la identificación forense, las pruebas microbiológicas ambientales, las pruebas de seguridad alimentaria, la cría de animales y la investigación en biología molecular.

Clasificación del sistema de extracción de ácidos nucleicos

1. Dividido según el tamaño del modelo de instrumento

1) Estación de trabajo líquida automática

La estación de trabajo automática de líquidos es un dispositivo muy potente, que completa automáticamente la dispensación y aspiración de líquidos, e incluso puede realizar la automatización completa de la extracción, amplificación y detección de muestras integrando funciones como amplificación y detección. La extracción de ácidos nucleicos es solo una aplicación de su función y no es adecuada para la extracción rutinaria de ácidos nucleicos en el laboratorio. Generalmente se aplica a las necesidades experimentales de un solo tipo de espécimen y una gran cantidad de especímenes (al menos 96, generalmente varios cientos) a la vez. El establecimiento de plataformas y el funcionamiento de estaciones de trabajo automáticas requieren fondos relativamente grandes.

2) Sistema automático de extracción de ácido nucleico a pequeña escala El instrumento automático a pequeña escala logra el propósito de la extracción automática de ácido nucleico a través de la particularidad de la estructura operativa, y se puede utilizar en cualquier laboratorio.

2. Difieren según el principio de extracción

1) Instrumentos que utilizan el método de columna de giro

El sistema de extracción de ácido nucleico del método de columna centrífuga utiliza principalmente una combinación de una centrífuga y un dispositivo de pipeteo automático. El rendimiento es generalmente de 1 a 12 muestras. El tiempo de operación es aproximadamente el mismo que el de la extracción manual. No mejora la eficiencia real del trabajo y es caro. Diferentes modelos Los consumibles del instrumento no son universales, y solo son adecuados para laboratorios de gran escala con fondos suficientes.

2) Instrumentos que utilizan el método de cuentas magnéticas

Usando perlas magnéticas como portador, usando el principio de perlas magnéticas que adsorben ácidos nucleicos bajo valores altos de sal y pH bajos, y separándolos de ácidos nucleicos bajo valores bajos de sal y pH altos, todo el proceso de extracción y purificación de ácidos nucleicos se realiza moviendo las perlas magnéticas o transfiriendo el líquido. Debido a su principio único, se puede diseñar en una variedad de fundentes. Puede extraerse de un solo tubo o de 8 a 96 muestras, y su funcionamiento es sencillo y rápido. Solo se necesitan 30-45min para extraer 96 muestras, lo que mejora enormemente La eficiencia del experimento y el bajo costo permiten que sea utilizado en diferentes laboratorios. Actualmente es el principal instrumento del mercado.

El sistema automático de extracción de ácido nucleico del método de perlas magnéticas se divide en el método de varilla magnética y el método de succión.

Permítanme hablar primero sobre el método de succión: como su nombre lo indica, el método de succión se lleva a cabo mediante un dispositivo de pipeteo automático. La solución de lisis se agrega a través del dispositivo de pipeteo automático y las perlas magnéticas se adsorben; se retira la solución de lisis, se añade la solución de enjuague, se adsorben las perlas magnéticas y se retira el enjuague. Solución, agregue tampón de elución. Parece que no hay ningún problema con los pasos, pero el mayor problema con el método de succión es que para no quitar las perlas magnéticas al eliminar el líquido de desecho, la pipeta no debe estar demasiado cerca de las perlas magnéticas para evitar las perlas magnéticas. y que el líquido residual sea succionado. Siempre hay una pequeña parte del líquido residual que no se puede eliminar por completo cada vez, especialmente el dispositivo con el imán en la parte inferior. Debido a que el imán atrae las perlas magnéticas hacia el fondo, la pipeta no debe estar demasiado cerca del fondo, de modo que la solución de enjuague no se pueda eliminar por completo. La eliminación, la sal residual y el etanol en la solución de enjuague afectarán la eficacia de elución posterior y la tasa de éxito de la PCR; el imán en el costado del dispositivo tendrá menos líquido residual, pero la eficiencia de elución no es buena, dependiendo de la autodisolución del ADN para lavarse en la solución des-tamponada, a menos que espere más de media hora, unas 96 estaciones de trabajo de extracción automática de ácido nucleico requieren 150 minutos para una ronda de extracción. El mismo tiempo para el método de 32 imanes se puede utilizar durante 5 rondas.

Hablemos del sistema de extracción de ácido nucleico con método de varilla magnética: el flujo suele tener 8, 16, 32, 96 canales. En comparación con el método de succión, la ventaja del método de varilla magnética es que el líquido en cada paso no permanece, porque la varilla magnética solo quita las perlas magnéticas y las transfiere. Vaya a los pozos de reacción correspondientes en el siguiente paso. Además, el sistema de extracción del método de varilla magnética es mejor para tener funciones más completas, como el calentamiento, y cada tanque de calentamiento debe tener una temperatura controlada de forma independiente, de modo que se pueda configurar el calentamiento, la pirólisis y la elución. Diferentes temperaturas, otro punto muy importante es que el motor que acciona la varilla magnética debe ser capaz de accionar la varilla magnética para mezclar y agitar rápidamente el líquido, de manera que se facilite la automatización y se facilite la lisis y el enjuague completo. La selección de flujo del método de varilla magnética es mejor para 32 canales. Los 96 canales parecen tener un flujo más alto, pero hay un problema muy práctico. Cuando se transfieren 96 varillas magnéticas de una placa a otra, las varillas magnéticas Qué hacer si el líquido cae a la mitad, goteará en otros orificios y causará contaminación, y la varilla magnética de 32 canales no atraviesa el cielo por encima de otras muestras , por lo que no habrá contaminación cruzada.

El principio básico del sistema de extracción de ácido nucleico con perlas magnéticas.

1. El método de succión

1. El método de succión, también llamado método de pipeteo, consiste en extraer ácido nucleico fijando perlas magnéticas y transfiriendo líquido. Generalmente, el sistema operativo controla el brazo mecánico para realizar la transferencia. El proceso de extracción es el siguiente:

1) Lisis: agregue la solución de lisis a la muestra, realice la mezcla y la reacción completa de la solución de reacción mediante movimiento mecánico y calentamiento, lisis celular y liberación de ácido nucleico.

2) Adsorción: agregue perlas magnéticas a la solución de lisis de muestra y mézclelas bien. Las perlas magnéticas tienen una fuerte afinidad por los ácidos nucleicos con valores altos de sal y bajos valores de pH para adsorber los ácidos nucleicos. Bajo la acción de un campo magnético externo, las perlas magnéticas se separan de la solución. , Utilice la punta para eliminar el líquido y deséchelo en el tanque de desechos, y deseche la punta.

3) Lavado: Elimine el campo magnético externo, reemplácelo con una punta nueva, agregue la solución tampón de lavado, mezcle bien para eliminar las impurezas y elimine el líquido bajo la acción de un campo magnético externo.

4) Elución: Retire el campo magnético externo, reemplácelo con una punta nueva, agregue tampón de elución y mezcle bien. El ácido nucleico unido se separa de las perlas magnéticas para obtener ácido nucleico purificado.

2. Método de varilla magnética

El método de varilla magnética realiza la separación de ácidos nucleicos fijando el líquido y transfiriendo las perlas magnéticas. El principio y el proceso son los mismos que los del método de succión, pero la diferencia es el método de separar las perlas magnéticas y el líquido. El método de la varilla magnética consiste en separar las perlas magnéticas del líquido de desecho mediante la adsorción de las perlas magnéticas en la varilla magnética y colocarlas en el siguiente líquido para realizar la extracción de ácido nucleico.

Características del extractor de ácido nucleico con método de perlas magnéticas

1. Capaz de realizar operaciones automáticas y de alto rendimiento.

2. La operación es simple y rápida.

3. Seguridad y protección del medio ambiente.

4. Alta pureza y alto rendimiento.

5. Sin contaminación y resultados estables.

6. Bajo costo, conveniente para una amplia aplicación.

7. Puede procesar diferentes tipos de muestras al mismo tiempo.

Precauciones

1. El entorno de instalación del instrumento: presión atmosférica normal (la altitud debe ser inferior a 3000 m), temperatura 20-35 ℃, temperatura de uso típica 25 ℃, humedad relativa 10% -80%, el flujo de aire sin obstrucciones es 35 ℃ o menos.

2. Evite colocar el instrumento cerca de una fuente de calor, como un calentador eléctrico; al mismo tiempo, para evitar cortocircuitos de los componentes electrónicos, evite que salpique agua u otros líquidos.

3. Las rejillas de ventilación de entrada y salida de aire están ubicadas en la parte posterior del instrumento y, al mismo tiempo, evitan que el polvo o las fibras se acumulen en la entrada de aire para mantener el conducto de aire libre de obstrucciones.

4. El extractor de ácido nucleico se encuentra al menos a 10 cm de otras superficies verticales.

5. Conexión a tierra del instrumento: para evitar accidentes por descargas eléctricas, el cable de alimentación de entrada del instrumento debe estar conectado a tierra.

6. Manténgase alejado de circuitos activos: los operadores no pueden desmontar el instrumento sin autorización. El reemplazo de componentes o los ajustes internos deben ser realizados por personal de mantenimiento profesional calificado. No reemplace componentes cuando la alimentación esté encendida.