磁珠法核酸提取影响因素有哪些？

近两年随着病原体检测热度攀升，病原体核酸检测逐步走入人们视野，成为病原体检测的金标准。面对大批量样本，短时间内需要出具检测结果，人们对快速、高效检测方法的需求越来越迫切。而核酸提取作为核酸检测的重要步骤，也面临着通量和高效率的要求。全自动核酸提取（磁珠法核酸提取）因其具有快速高效、简单易用以及安全无毒等特点迅速得到推广应用，成为实验室的标配。不过，在提取过程中，某些因素会影响到提取结果，需要操作人员注意。爱森小编为大家整理了磁珠法核酸提取影响因素的相关知识，就分享给大家吧。

磁珠法核酸提取由裂解、洗涤和洗脱等步骤组成，影响这些步骤的因素同样也会影响磁珠的提取效率。下面我们对每一个步骤进行逐一解释。

　　一、裂解步骤影响因素

　　1、裂解液成分

对于一些难裂解的样本，可以通过提高胍盐浓度以及表面活性剂浓度来增强裂解液的裂解能力。胍盐和表面活性剂可以促使蛋白变性，破坏细胞膜，使核酸和蛋白解离，从而释放更多的核酸。

　　2、裂解温度和时间

提高温度和增加裂解时间可以让细胞裂解更彻底，得到更多核酸，需要摸索合适的温度和时间；温度过高或时间过长，也有可能导致核酸断裂或醇类挥发导致的提取效率下降。

　　3、磁珠吸附能力

磁珠提取系列磁珠一般是硅羟基磁珠，磁珠吸附能力受到磁珠比表面积以及修饰基团的密度影响。一般选择修饰基团多，比表面积大的磁珠，一般磁珠粒径越小，比表面积越大。但也不是磁珠粒径越小越好，磁珠粒径小，吸附速度也会变慢，可根据实际样本情况自行选择。结合缓冲液一般用异丙醇或乙醇结合。通常可以通过提高醇的比例来增强结合能力，同时也要提高离液盐的浓度来促进核酸与磁珠的结合。

　　二、洗涤步骤影响因素

洗涤对于整个提取步骤至关重要，关系到核酸的纯度，核酸的纯度直接影响下游PCR应用。磁棒的振荡幅度和混合时间会影响洗涤效率。

　　1、磁棒振荡幅度

磁棒振荡幅度太小，就有杂质残留在磁珠上会影响磁珠吸附核酸的能力；振荡太剧烈，会丢失部分核酸或造成核酸的断裂、降解，得率下降。

　　2、混合时间

混合时间太短，就有杂质残留在磁珠上会影响磁珠吸附核酸的能力；混合时间太长，会丢失部分核酸或造成核酸的断裂、降解，得率下降。

　　三、洗脱步骤因素影响

洗脱步骤直接影响核酸得率，影响洗脱效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脱温度和时间。

　　1、磁珠干燥程度

磁珠未充分晾干，可能会有醇类等杂质残留，影响后续PCR反应；磁珠过分干燥，核酸可能会干结在磁珠上，导致洗脱效率下降。

　　2、洗脱温度和时间

适当提高洗脱温度和时间，有利于核酸从磁珠上游离下来，时间过长或温度过高，核酸有可能会降解，需要把握其中的平衡。

关于磁珠法核酸提取影响因素有哪些的相关内容即是上文所述，在进行磁珠法核酸提取时要确保上述因素合理，这样提取质量也能更好。爱森生物科技在核酸提取系统及核酸提取试剂盒生产方面有丰富经验，采用优质工艺，质量可靠，欢迎有需要的客户致电咨询。