Как повысить точность тестирования нуклеиновых кислот COVID-19?

/in /by

С возобновлением эпидемии COVID-19 потребность в тестировании нуклеиновых кислот резко возросла. Однако точность результатов тестирования нуклеиновых кислот привлекает широкое внимание. Ситуация «пропавших без вести» заставила некоторых клиницистов и общественность задавать вопросы о качестве тестовых наборов. сомневаться. Итак, какие факторы могут повлиять на текущую точность обнаружения нуклеиновых кислот? Как профессиональный поставщик наборов для экстракции нуклеиновых кислот, Ascent рассказала нам, как повысить точность обнаружения нуклеиновых кислот COVID-19 при сборе образцов, хранении и транспортировке образцов, экстракции нуклеиновых кислот и тестировании амплификации.

1. Сбор образцов

Правильный отбор проб — ключ к успеху эксперимента. Понятно, что из-за ограничения маневренности наиболее распространенным методом отбора проб является использование мазков из носоглотки, мокроты или жидкости для альвеолярного лаважа. Самый распространенный метод — это забор мазков из носоглотки. Однако метод взятия мазка из носоглотки влияет на точность теста. Лучше всего, чтобы у пациента была опытная медсестра. Необходимо собрать достаточно эффективных клеток из носоглотки пациента. Неопытные медсестры могут быть не в состоянии получить квалифицированные образцы. .

Кроме того, мазки из носоглотки и консервационные растворы, используемые для сбора образцов, также влияют на качество и сохранность собранных образцов. Рекомендуется использовать стерильные флокированные тампоны, которые могут поглощать и выделять больше образцов и не содержат свободной ДНК. Раствор фермента и РНКазы для сохранения клеток может лучше сохранить вирусную нуклеиновую кислоту и избежать деградации РНК COVID-19.

2. Хранение и транспортировка образцов.

COVID-19 — это РНК-вирус. Особое внимание следует уделять температуре хранения и соответствующей продолжительности хранения и транспортировки образцов, чтобы избежать деградации нуклеиновых кислот и получения ложноотрицательных результатов. Образцы должны быть отправлены для проверки как можно скорее после сбора и отправлены в лабораторию в течение 2–4 часов после сбора. Образцы крови следует транспортировать при комнатной температуре, а другие образцы — при температуре от 2 ° C до 8 ° C; если время транспортировки превышает 24 часа, образцы следует хранить при температуре -70 ° C или ниже, а транспортировка на короткие расстояния должна осуществляться при температуре от 2 ° C до 8 ° C. Для перевозки на дальние расстояния следует использовать транспортировку сухим льдом. Избегайте многократного замораживания и оттаивания во время транспортировки и хранения образцов.

3. Экстракция нуклеиновой кислоты

Тестирование нуклеиновых кислот предъявляет высокие требования к лабораториям, оборудованию, персоналу и реагентам. Необходимы специальные лабораторные перегородки для ПЦР, чтобы гарантировать точность результатов теста. Экстракция нуклеиновой кислоты является важным этапом обнаружения нуклеиновой кислоты.

В настоящее время утвержденный набор содержит только реагенты для амплификации, необходимые для обнаружения нуклеиновых кислот COVID-19, и не содержит реагентов для экстракции нуклеиновых кислот. Могут быть различия в эффективности экстракции различных реагентов для экстракции нуклеиновых кислот или систем экстракции нуклеиновых кислот. Рекомендуется использовать проверенные методы экстракции и экстракционные реагенты для экстракции нуклеиновых кислот, чтобы обеспечить точность результатов теста.

Чтобы обеспечить безопасность инспекторов, а также чистоту и эффективность экстракции нуклеиновых кислот, можно использовать автоматизированный метод экстракции нуклеиновых кислот, основанный на адсорбции магнитных гранул. Многие авторитетные лаборатории и соответствующие эксперты рекомендуют использовать малогабаритный полуавтоматический прибор для экстракции нуклеиновых кислот, поместить его в шкаф биологической безопасности и выполнить все этапы загрузки образца и экстракции нуклеиновой кислоты в шкафу безопасности, что является простым и эффективным. , и защищает безопасность операторов.

Pre-packed nucleic acid extraction kit

4. Обнаружение усиления

Обнаружение нуклеиновых кислот COVID-19 в основном нацелено на открытую рамку считывания 1ab (ORF1ab), белок нуклеокапсида (N) и белок оболочки (E) генома COVID-19. Чтобы подтвердить, что случай положительный в лаборатории, выполняются следующие условия: три мишени (ORF1ab, N, E), специфические результаты флуоресцентного анализа RT-PCR в реальном времени в одном и том же образце более двух (включая два) положительных. Если есть положительный результат теста для одной цели, требуется повторный отбор проб и повторное тестирование.

Отрицательные результаты не могут исключить новые инфекции COVID-19. Необходимо исключить факторы, которые могут давать ложноотрицательные результаты, в том числе: низкое качество образцов, таких как респираторные образцы из ротоглотки и других частей; образцы собраны слишком рано или слишком поздно; ненадлежащее хранение, транспортировка и обработка образцов; причины самой технологии, такие как ингибирование ПЦР и т. д.

В связи с серьезным распространением эпидемии разработка наборов для обнаружения нуклеиновых кислот COVID-19 и получение разрешения на экстренную помощь являются неотложными. На ранней стадии может быть недостаточно данных проверки клинических образцов, и существует риск недостаточной чувствительности и оптимизации специфичности. Характеристики реагентов и процент положительного обнаружения у разных производителей различаются. Большинство наборов обнаруживают только две мишени — ORF1ab и N-ген, а положительные результаты по одной мишени для некоторых реагентов составляют более 20% положительных результатов. Для положительных результатов с одной целью и подозрительных результатов рекомендуется использовать разные наборы для проверки или отправить CDC для подтверждения, но это увеличит рабочую нагрузку и задержит время диагностики. Из общедоступной информации, в настоящее время одобренные реагенты не содержат фермент UNG и систему защиты от загрязнения dUTP, и существуют риски заражения и ложных срабатываний.

Каковы функции иммуномагнитных шариков?

/in /by

В последние годы иммуномагнитные шарики привлекают все больше внимания ученых, и их применение в области биомедицины становится все более и более обширным. Но на самом деле иммуномагнитные шарики — это не новые продукты, которые были разработаны совсем недавно. Уже в конце 1980-х годов он начал играть огромную роль в области разделения и обогащения клеток.

Иммуномагнитные шарики обычно обладают сверхсильным парамагнетизмом. В присутствии внешнего электрического поля иммуномагнитные шарики будут проявлять магнетизм и агрегироваться. После выхода из магнитного поля они могут равномерно диспергироваться, как обычные частицы. Поверхность иммуномагнитных шариков обычно имеет большое количество поверхностно-активных групп, и биологически активные молекулы могут адсорбироваться или связываться с ее поверхностью, чтобы реализовать их использование в сортировке клеток, разделении и экстракции нуклеиновых кислот, иммуноанализе, очистке биологических макромолекул и иммобилизации ферментов. и т.д. Приложения в нескольких областях.

Экстракция нуклеиновых кислот — одно из первых применений магнитных шариков, и этот метод не сильно изменился за десятилетия. Регулируя значение pH буфера, нуклеиновая кислота связывается с магнитными шариками посредством электростатической адсорбции. Затем, в условиях внешнего электрического поля, отработанная жидкость удаляется и промывается, и, наконец, может быть получен образец чистой нуклеиновой кислоты.

Метод магнитных шариков позволяет избежать таких этапов, как вакуумирование и высокоскоростное центрифугирование, и может уменьшить повреждение образца, вызванное внешними силами. Метод экстракции с помощью магнитных шариков прост в использовании, содержит простые реагенты и подходит для высокопроизводительных автоматизированных операций в 96-луночных или 384-луночных планшетах.

С развитием технологий все больше и больше производителей разрабатывают различные наборы для экстракции нуклеиновых кислот на основе иммуномагнитных шариков. Различные химические модификации на поверхности магнитных шариков позволяют проводить сложные эксперименты.

Immunomagnetic Beads Chemiluminescent Magnetic Beads

Сортировка ячеек

Сортировка клеток — еще одно популярное применение иммуномагнитных шариков. Используя иммуномагнитные шарики в сочетании с маркерами на поверхности клеток-мишеней, клетки-мишени высокой чистоты можно отделить от сложных смесей клеток в течение нескольких минут. Иммуномагнитные шарики не активируют клетки и не влияют на функцию и жизнеспособность клеток, а физиологические функции клеток не изменяются, поэтому клетки с магнитной меткой можно сразу использовать для анализа и последующих экспериментов.

Другой распространенный метод сортировки ячеек — FACS. В случае сортировки отдельных ячеек, сортировки нескольких ячеек одновременно или сортировки на основе внутриклеточных маркеров ячеек (таких как GFP) метод FACS является более предпочтительным. По сравнению с FACS, операция сортировки магнитных шариков проще и быстрее. Для общей сортировки клеток может быть предпочтительным метод иммуномагнитных шариков.

Разделение и очистка антител

Традиционное разделение и очистка антител обычно использует хроматографию, которая является громоздкой, требует много времени, требует большого количества оборудования и требует больших капиталовложений, в то время как магнитная очистка антител на основе иммуномагнитных шариков, покрытых белком, может обеспечить экспрессию продуктов моноклональных антител посредством простой магнитной адсорбции. Цель разделения моноклональных антител. По сравнению с традиционными методами разделения, иммуномагнитные шарики могут одновременно выполнять разделение и обогащение, что эффективно повышает скорость разделения и эффективность обогащения. Иммуномагнитные шарики могут также реализовывать автоматизацию и массовую работу, удовлетворять требованиям биологии к высокопроизводительным операциям и обладают такими характеристиками, как удобство использования, простота в эксплуатации, короткое время и низкая стоимость.

Стимуляция клеток

Иммуномагнитные шарики также играют важную роль в клеточной терапии. При активации и размножении Т-клеток и NK-клеток антитела или иммуномагнитные шарики, связанные с белками, могут заменять APC, что в определенной степени позволяет избежать утомительной операции клеточного процессинга. После завершения стимуляции и активации клеток иммунные магнитные шарики можно полностью удалить с помощью магнитного поля. По сравнению с прямым добавлением антител или белков для стимуляции предотвращается остаточное загрязнение растворимыми антителами или митогенами. Один и тот же иммуномагнитный шарик может быть связан с множеством необходимых антител и белков, а эффект близости может значительно оптимизировать эффект стимуляции клеток и повысить эффективность размножения клеток.

Диагностика in vitro

Использование иммуномагнитных шариков может сочетать характеристики целевых молекул, а методы их применения в диагностике in vitro также расширяются. Во-первых, иммуномагнитные шарики используются в качестве субстратов, которые можно использовать для захвата образцов. Поскольку магнитные шарики обладают хорошей текучестью и большой площадью поверхности, они могут полностью обнажить белок-лиганд и значительно повысить эффективность захвата. В то же время использование различных методов обнаружения, таких как флуоресценция, электрохимия или хемилюминесценция, также дает большую свободу при разработке методологии. Кроме того, иммуномагнитные шарики также можно использовать в качестве маркеров, а магнитные свойства магнитных шариков можно использовать для получения сигналов. Этот метод обычно имеет чрезвычайно высокую чувствительность, которая может достигать фг / мл.

Внедрение метода извлечения нуклеиновых кислот с помощью магнитных шариков

/in /by

С ростом популярности тестирования нуклеиновых кислот на новый коронавирус, тестирование нуклеиновых кислот прочно вошло в сердца людей и стало «золотым стандартом» для обнаружения патогенов. После новой коронной эпидемии потребовалось большое количество результатов анализа проб за короткий период времени, и потребность в быстром и эффективном тестировании на нуклеиновые кислоты становилась все более и более насущной. Экстракция нуклеиновых кислот, как важный этап обнаружения нуклеиновых кислот, также требует высокой производительности и эффективности.

Обнаружение нуклеиновых кислот зависит от развития технологии экстракции нуклеиновых кислот. В настоящее время основные клинические применения методов экстракции нуклеиновых кислот включают метод магнитных шариков, метод спин-колонки, метод кипячения и метод быстрого высвобождения нуклеиновых кислот. Метод извлечения нуклеиновой кислоты с помощью магнитных шариков широко используется. Реализуйте автоматический метод извлечения нуклеиновой кислоты, а метод автоматического извлечения магнитных шариков в основном включает извлечение магнитного стержня и извлечение пипеткой.

1. Принцип метода магнитных шариков для экстракции нуклеиновых кислот.

Технология экстракции нуклеиновых кислот методом магнитных гранул — это новый тип технологии экстракции нуклеиновых кислот, в которой в качестве носителя используются нанобиологические магнитные гранулы. Молекулы нуклеиновой кислоты могут специфически распознавать и связываться с гидроксильными группами кремния на поверхности магнитных шариков, а также агрегировать или диспергироваться под действием внешнего магнитного поля. Полностью избавьтесь от ручных операций, таких как центрифугирование и экстракция супернатанта в традиционном процессе экстракции нуклеиновых кислот, чтобы реализовать метод экстракции и очистки нуклеиновых кислот.

Большинство используемых в настоящее время магнитных шариков имеют структуру «ядро-оболочка», в которой суперпарамагнитные наночастицы используются в качестве «ядра», а затем на поверхность ядра наматывают слой полимерного органического соединения и функциональный базовый слой. В качестве «скорлупы» он лучше взвешен в растворе. Он намагничивается в магнитном поле и собирается под действием магнитной силы. Его очень легко отделить от немагнитных материалов. Во время работы нет необходимости в центробежных операциях.

Carboxyl magnetic beads

2. Отличия экстракции нуклеиновых кислот методом магнитных шариков.

Экстракция нуклеиновой кислоты с помощью магнитных гранул состоит из лизиса, связывания, промывки, элюирования и других этапов. Реагенты для экстракции нуклеиновых кислот на основе магнитных шариков, производимые разными производителями, различаются, в основном, это выражается в: (1) разном размере магнитных шариков; (2) модификация магнитных шариков. Различные методы; (3) Различные методы стирки; (4) Различные размеры выборки.

Магнитные шарики имеют малый размер частиц, большую удельную поверхность и высокую способность захвата нуклеиновых кислот. Их можно проверить на машине с помощью магнитных шариков для повышения чувствительности обнаружения. Размер частиц разный, и существуют разные предпочтения для фрагментов нуклеиновых кислот разного размера. Вообще говоря, магнитные шарики с большим размером частиц обладают большей магнитной чувствительностью и большей способностью захватывать небольшие фрагменты нуклеиновой кислоты. Магнитные шарики с меньшим размером частиц обладают меньшей магнитной чувствительностью и большей способностью захватывать крупные нуклеиновые кислоты. Магнитные шарики с разными размерами частиц имеют разные удельные площади поверхности и разные возможности захвата нуклеиновых кислот. В то же время магнитные шарики с более крупным размером частиц имеют меньшую удельную поверхность и несколько худшую способность захватывать нуклеиновые кислоты; магнитные шарики с меньшим размером частиц имеют большую удельную поверхность и обладают немного большей способностью захватывать нуклеиновые кислоты. Стадия элюирования напрямую влияет на выход нуклеиновой кислоты. Конечно, магнитные шарики имеют малый размер частиц и высокий коэффициент пропускания света, а также могут использовать магнитные шарики на машине, чтобы определять, когда они не влияют на сбор сигнала обнаружения флуоресцентным прибором количественной ПЦР (добавление реакции ПЦР во время элюирования) обнаружение осуществляется путем смешивания магнитных шариков и обнаружения нуклеиновой кислоты. Потери нуклеиновой кислоты практически нет. Все матричные нуклеиновые кислоты обнаруживаются на машине, что может повысить чувствительность обнаружения нуклеиновых кислот.

Модификация зонда нуклеиновой кислоты, нацеленного на функциональную группу, дополнительно улучшает эффективность экстракции целевой нуклеиновой кислоты и повышает чувствительность обнаружения целевой нуклеиновой кислоты. Функциональные группы, содержащиеся в функциональном базовом слое структуры оболочки магнитного шарика, различны, и специфическая связывающая способность магнитного шарика и нуклеиновой кислоты различна. Обычно используемые модифицированные функциональные группы — это амино (-NH2), карбоксил (-COOH) и гидроксил (-OH).

Поскольку функциональные группы различны, используемые буферы связывания также различаются. Гидроксильная группа является отрицательной и щелочной и может стабильно существовать в щелочных растворах, в то время как карбоксильная группа является кислой и может стабильно существовать в кислых растворах. Метод модификации зонда нуклеиновой кислоты, нацеленный на функциональную группу, может улучшить специфическую связывающую способность целевой последовательности нуклеиновой кислоты и дополнительно повысить эффективность экстракции нуклеиновой кислоты.

Чем меньше время промывки, тем меньше потеря нуклеиновой кислоты и тем выше выход нуклеиновой кислоты. Вообще говоря, чем больше время промывки, тем больше вероятность потери нуклеиновой кислоты и тем ниже может быть выход нуклеиновой кислоты. Чем больше шагов повлияет на стабильность автоматической экстракции нуклеиновых кислот, тем труднее будет добиться автоматизации.

Увеличьте размер образца и улучшите чувствительность обнаружения нуклеиновых кислот. Увеличение размера выборки также является обычной практикой некоторых производителей. Например, наборы для количественного определения нуклеиновых кислот вируса гепатита В от Roche Diagnostics и Abbott Diagnostics могут достичь цели высокочувствительного обнаружения за счет увеличения размера образца и увеличения концентрации нуклеиновых кислот, а их чувствительность может достигать 10 МЕ / мл.

Короче говоря, метод извлечения нуклеиновых кислот с помощью магнитных шариков в настоящее время является наиболее широко используемой на рынке клинически автоматизированной технологией извлечения нуклеиновых кислот, и он играет основную роль в предотвращении и контроле новой эпидемии коронавируса. Реагенты для экстракции нуклеиновых кислот методом магнитных гранул, производимые разными производителями, имеют разные методы лизиса нуклеиновых кислот, связывающую способность магнитных гранул, методы промывки и методы элюирования. Достаточно высока только эффективность лизиса нуклеиновой кислоты, достаточно высокая способность к специфическому связыванию магнитных гранул и достаточное количество промывок. Только небольшое количество и достаточно высокая эффективность элюирования (или элюция исходной нуклеиновой кислоты образца) может гарантировать более высокую эффективность экстракции нуклеиновой кислоты, и можно гарантировать более высокую чувствительность или сверхчувствительность обнаружения нуклеиновой кислоты. Стабильность автоматической экстракции нуклеиновых кислот.

Как пройти тестирование на нуклеиновую кислоту?

/in /by

Теперь, в связи с распространением эпидемии COVID-19, мы обязаны проводить тестирование на нуклеиновую кислоту, когда путешествуем или путешествуем в другие страны или провинции. Нам нужен отрицательный результат теста на нуклеиновую кислоту. Тогда что нам делать?

1. Перед тестированием:

(1) Старайтесь не есть за 2 часа до теста на нуклеиновую кислоту, чтобы избежать рвоты;

(2) Не пейте напитки (включая воду), не курите, не пейте и не жуйте жевательную резинку за 30 минут до отбора проб;

(3) Во время клинического осмотра уменьшите глотательные движения и избегайте откашливания горла (например, отхаркивания и отхаркивания);

(4) Перед забором мазков из носоглотки обследуемое лицо должно проинформировать персонал, занимающийся сбором, о наличии у него соответствующей истории болезни в прошлом или связанных с этим вопросов. Например, перенесенные операции на носу, искривление носовой перегородки, заболевание крови, заболевание горла или прием антикоагулянтов и другие связанные факторы риска;

(5) Тестирующий должен правильно носить маску, снимать маску перед тестом и носить ее сразу после теста. Можно приготовить запасную маску, которую можно легко заменить в любой момент после заражения.

Manual nucleic acid extraction kit

2. Тестирование:

(1) При взятии мазка из ротоглотки субъект запрокидывает голову и открывает рот, чтобы издать звук «ах», который помогает обнажить горло, но при этом могут возникать такие симптомы, как сухой кашель, тошнота и рвота. . Субъект может сотрудничать. Коллекционеры пытаются расслабиться и глубоко вздохнуть;

(2) Во время сбора может возникнуть болезненность носа и раздражение при чихании, которое можно немедленно прикрыть бумажным полотенцем (подготовленным заранее) или локтем;

3. После тестирования:

(1) Покиньте место сбора сразу после сбора и избегайте плевков и рвоты вокруг места сбора;

(2) Обратите внимание на гигиену рук до и после теста на нуклеиновую кислоту. Вы можете использовать дезинфицирующее средство для рук или спирт, чтобы вытереть руки.

(3) Кроме того, для повышения эффективности вы можете подготовиться заранее: из-за жесткой защиты медицинского персонала вы можете не услышать речь. В то же время это также должно повысить эффективность. Обязательно принесите свое удостоверение личности или книгу регистрации домохозяйства и наденьте маску (желательно две, из которых одна запасная) с пакетом салфеток (сбор может вызвать дискомфорт и слезы), вы можете заранее написать записку со своим именем , Идентификационный номер, текущий адрес и контактный номер (пожалуйста, держите шрифт аккуратным при написании, чтобы персонал не был неузнаваемым)) Соответствующему персоналу!

Pre-packed nucleic acid extraction kit (inner packaging)

Нуклеиновая кислота — это на самом деле генетический материал, или гены, говоря языком непрофессионала. Возьмем, к примеру, вирусы. Их формы жизни очень просты, они состоят только из внешних капсидов и обернутого в них генетического материала. Генетический материал вируса может быть ДНК или РНК, и он делится на одноцепочечный и двухцепочечный, а именно на одноцепочечную ДНК, двухцепочечную ДНК, одноцепочечную РНК и двухцепочечную РНК. Генетический материал нового коронавируса — одноцепочечная РНК, которая определяет синтез внешнего капсида, а также патогенность и передачу вируса.

Тестирование на нуклеиновые кислоты — важное средство предотвращения эпидемии и борьбы с ней. У разных вирусов разные формы, потому что они несут разные нуклеиновые кислоты. Нуклеиновая кислота всех вирусов имеет свою характерную часть. Тест на нуклеиновую кислоту предназначен для амплификации характерной части вирусного гена в большом количестве для достижения количества обнаружения, которое может быть идентифицировано. Таким образом, положительный тест на нуклеиновую кислоту определенного вируса может использоваться в качестве диагностики этой вирусной инфекции. Основа. Тест на нуклеиновую кислоту вируса COVID-19 предназначен для обнаружения как минимум двух характерных фрагментов в его РНК, и если он обнаружен, он будет признан положительным.

Как выбрать подходящую систему экстракции нуклеиновых кислот, и в чем заключаются недоразумения при выборе?

/in /by

В связи с быстрым развитием биотехнологии с применением технологии ПЦР в различных областях, включая обнаружение медицинских заболеваний, обнаружение сельскохозяйственных генетических модификаций и многие другие приложения, высокопроизводительная экстракция нуклеиновых кислот из образцов стала чрезвычайно актуальной, и многие компании начали с Инструмент автоматического извлечения нуклеиновой кислоты, есть различные принципы. Чтобы выбрать подходящий инструмент для автоматической экстракции нуклеиновых кислот, требуется подробный анализ.

С точки зрения принципа экстракции существуют метод спиновой колонки и метод магнитных шариков. Система автоматической экстракции нуклеиновых кислот методом центробежной колонки использует центрифугу и автоматическое пипеточное устройство для объединения метода. Пропускная способность обычно составляет 1-12 проб. Время аналогично ручному извлечению. Это не повышает эффективность, да и цена не из дешевых. Не универсальный, подходит для лабораторий с достаточным финансированием.

Автоматическая система экстракции нуклеиновой кислоты методом магнитных шариков делится на метод магнитного стержня и метод всасывания. Во-первых, метод всасывания. Как следует из названия, метод отсасывания осуществляется с помощью автоматического дозатора, а раствор для лизиса и магнитные шарики добавляются через автоматическое дозирующее устройство. Адсорбция, аспирация лизата, добавление промывочного раствора, адсорбция с помощью магнитных шариков, аспирация промывочного раствора и добавление буфера для элюирования.

HERO 96

Кажется, что нет никаких проблем с этапами, но самая большая проблема с методом всасывания заключается в том, что для того, чтобы не удалить магнитные шарики при удалении отработанной жидкости, пипетка не должна находиться слишком близко к магнитным шарикам, чтобы предотвратить магнитные шарики. и отработанная жидкость от всасывания. Всегда есть небольшая часть сточной жидкости, которую невозможно полностью удалить каждый раз, особенно устройство с магнитом внизу. Поскольку магнитные шарики адсорбируются магнитом снизу, пипетка не может быть слишком близко ко дну, так что промывочный раствор не может быть полностью удален. Удаление остаточной соли и этанола в промывочном растворе повлияет на последующую эффективность элюирования и успешность ПЦР; магнит на боковой стороне устройства будет иметь меньше остаточной жидкости, но эффективность элюирования невысока, поскольку ДНК растворяется в стирке. В очищенном от буфера растворе, если вы не ждете более получаса, поэтому на некоторых 96 рабочих станциях автоматической экстракции нуклеиновых кислот время цикла экстракции занимает 150 минут, а метод с 32 магнитами может занять 5 циклов за одно и то же время. .

Поговорим о системе экстракции нуклеиновых кислот методом магнитных стержней. У потока обычно 8, 16, 32, 96 каналов. По сравнению с методом всасывания преимущество метода магнитного стержня заключается в том, что жидкость на каждом этапе не остается, потому что магнитный стержень только забирает магнитные шарики и передает Go в соответствующую реакционную лунку на следующем этапе. Кроме того, экстракционный инструмент метода магнитного стержня должен быть более полным, например нагревательный, и каждый нагревательный резервуар должен иметь независимый контроль температуры, чтобы можно было настроить нагрев, лизис и элюирование. Различные температуры, еще один очень важный момент заключается в том, что двигатель, который приводит в движение магнитный стержень, должен иметь возможность приводить магнитный стержень в движение, чтобы быстро перемешивать и перемешивать жидкость, чтобы облегчить автоматизацию и помочь лизису и тщательному промыванию.

При выборе магнитного стержня лучше всего выбрать 32 канала. Кажется, что 96 каналов имеют более высокий поток, но есть очень практическая проблема. Когда 96 магнитных стержней переносятся с одной пластины на другую, магнитные стержни находятся наверху. Что делать, если жидкость упадет на полпути, капнет в другие отверстия и вызовет загрязнение, а 32-канальный магнитный стержень не пройдет по небу над другими образцами, поэтому перекрестного загрязнения не будет.

Вышеупомянутое является подходящим введением о выборе системы экстракции нуклеиновых кислот, но многие люди все еще легко ошибаются в понимании выбора. Следующие примеры иллюстрируют два наиболее распространенных недоразумения:

HERO 32

Заблуждение 1: разница между системой экстракции нуклеиновых кислот и рабочей станцией и неправильное понимание выбора

Многие производители рабочих станций часто говорят своим клиентам, продвигая свои рабочие станции, что система экстракции нуклеиновой кислоты полностью автоматическая, а система экстракции нуклеиновой кислоты — полуавтоматическая. Клиенты также субъективно думают, что рабочая станция может пипетировать, извлекать и делать что угодно, как если бы просто поместили образец. Войдите, вы можете получить нужную нуклеиновую кислоту, не беспокоясь ни о чем. Когда рабочая станция находится на месте, оказывается, что на самом деле все не так. Это не только не так хорошо, как ожидалось, но даже экстракция основной нуклеиновой кислоты затруднена. Так в чем причина? ?

Первый вопрос — проблема открытия крышки. Конструкции крышек пробирок для забора крови, пробирок для хранения слюны и пробирок для криоконсервации с двумерным кодом различаются, размеры и производители различаются. Как автоматически открывать крышку на рабочем месте? Эта проблема больше не решена.

Вторая проблема — это ввод штрих-кодов, штрих-кодов и QR-кодов, а также некоторых наклеенных вручную этикеток и рукописных этикеток, поэтому сканирование кодов по-прежнему выполняется вручную, что трудно автоматизировать.

Третья проблема заключается в том, что добавление жидкости автоматизировано. Рабочая станция может автоматически добавлять реагенты, что кажется преимуществом, но для добавления 96-луночного планшета требуется около 15-30 минут, а для экстракции обычно требуется шесть реагентов, то есть шесть планшетов. На это уходит около 1,5 часов. Многие экстракционные реагенты содержат этанол в высокой концентрации. В течение такого длительного времени концентрация этанола будет изменяться, что повлияет на эффективность и чувствительность экстракции. Кроме того, многие производители инструментов для экстракции имеют предустановленные комплекты, которые не нужно добавлять. жидкость.

Недоразумение 2: разница между импортным и отечественным производством, это самое большое недоразумение выбора.

Многие выбирают системы экстракции нуклеиновых кислот, исходя из привычного мышления, и считают, что импортные лучше отечественных; однако экстракторы нуклеиновых кислот представляют собой оборудование, ориентированное на применение, а не основное экспериментальное оборудование, не то оборудование, которое можно использовать после подключения к сети. Для экстракции нуклеиновых кислот требуется общее взаимодействие инструментов, вспомогательных наборов и прикладных программ. Производители должны выбрать наиболее подходящие наборы и процедуры для экстракции в соответствии с типом образца. Реагенты и процедуры часто нуждаются в оптимизации. Без технической поддержки производителя вы не сможете его использовать. . Это хорошо объясняет, почему многие импортные рабочие станции и экстракционные инструменты никем коллективно не используются; техническая поддержка импортных инструментов не успевает за ними, а технические посещения импортных инструментов требуют дорогих пошлин, и нет гарантии, что их можно будет использовать. Помогите клиентам оптимизировать экспериментальный план (конечно, необходимо взимать плату за доставку от двери до двери).

В целом, большинство систем экстракции нуклеиновых кислот не могут идти в ногу с отечественными производителями по удобству работы с прибором, чувствительности и производительности экстракции, комплектов инструментов, возможностям модернизации и настройки прибора и т.д. больше расстраивает. Нет необходимости доказывать превосходство импорта. Из приведенного выше обсуждения мы должны понять, что при выборе системы экстракции нуклеиновой кислоты лучше всего провести полное исследование или испытание, чтобы не попасть в пассивную ситуацию покупки системы экстракции нуклеиновой кислоты.

Какие существуют технологии очистки нуклеиновых кислот?

/in /by

В настоящее время технологии очистки нуклеиновых кислот, широко используемые в научных исследованиях, можно разделить на две категории: те, которые используют среды, и те, которые не используют среды. Если используется среда, нуклеиновая кислота одновременно отделяется от всех других примесей; если среда не используется, первым делом нужно отделить нуклеиновую кислоту от всех других примесей. Нуклеиновая кислота и соль отделяются от макромолекулярных примесей, а нуклеиновая кислота отделяется от соли путем осаждения нуклеиновой кислоты.

1) Классическая технология очистки с использованием экстракции фенол / хлороформ

После лизирования клеток водную фазу, содержащую нуклеиновую кислоту, отделяют центрифугированием и добавляют равный объем смеси фенол: хлороформ: изоамиловый спирт (объем 25: 24: 1). В соответствии с целью применения две фазы встряхивают и смешивают (подходит для разделения нуклеиновых кислот с малой молекулярной массой) или просто переворачивают и смешивают (подходит для разделения нуклеиновых кислот с высокой молекулярной массой), а затем центрифугируют. Гидрофобные белки разделяются на органическую фазу, а нуклеиновые кислоты остаются в верхней водной фазе.

Фенол — органический растворитель. Его следует предварительно пропитать буфером STE. Ненасыщенный фенол поглотит водную фазу и заберет часть нуклеиновой кислоты. Фенол также легко окисляется и желтеет, а окисленный фенол может вызывать разрыв или сшивание цепи нуклеиновой кислоты фосфодиэфирной связью в цепи нуклеиновой кислоты; поэтому при приготовлении насыщенного раствора фенола следует добавить специальное вещество, чтобы предотвратить окисление фенола. Хлороформ может удалять жир и денатурировать больше белка, тем самым повышая эффективность экстракции. Изоамиловый спирт может уменьшить образование пузырьков во время работы.

Соль нуклеиновой кислоты может быть осаждена некоторыми органическими растворителями, нуклеиновая кислота может быть сконцентрирована осаждением, тип буфера растворения нуклеиновой кислоты может быть изменен, а некоторые молекулы примесей могут быть удалены. Типичным примером является осаждение этанолом после экстракции фенолом и хлороформом. После добавления pH от 5,0 до 5,5 в водную фазу, содержащую нуклеиновую кислоту, конечная концентрация NaAc или KAc при конечной концентрации 0,3 М нейтрализует ионы натрия на фосфатном скелете нуклеиновой кислоты. Отрицательный заряд способствует гидрофобному ренатурации нуклеиновых кислот в кислой среде. Затем добавьте в 2–2,5 раза больше этанола, после определенного периода инкубации нуклеиновая кислота может эффективно осаждаться. Некоторые другие органические растворители (изопропанол, полиэтиленгликоль (ПЭГ) и т. Д.) И соли (10,0 моль / л ацетата аммония, 8,0 моль / л хлорид лития, хлорид магния и хлорид цинка низкой концентрации и т. Д.) Также используются для осаждение нуклеиновых кислот.

Nucleic acid purification magnetic beads NGS screening

2) Технология очистки с использованием ионообменных сред

Лизат пропускают через колонку, и нуклеиновая кислота связывается с ионообменной средой; после промывки для удаления остаточных примесей нуклеиновая кислота элюируется из среды высокосолевым буфером. После стандартного осаждения этанолом / изопропанолом, промывки этанолом, сушки и других операций получают чистую нуклеиновую кислоту и растворяют в подходящем буфере.

3) Технология очистки с использованием адсорбционных сред

Лизат пропускают через колонку, и нуклеиновая кислота селективно адсорбируется адсорбционной средой; после промывки для удаления остаточных примесей нуклеиновая кислота элюируется из среды водой или подходящим малосолевым буфером, и ее можно непосредственно использовать в последующих экспериментах.

4) Центрифугирование в градиенте плотности

Центрифугирование в градиенте плотности также используется для разделения и анализа нуклеиновых кислот. Двухцепочечная ДНК, одноцепочечная ДНК, РНК и белок имеют разную плотность, поэтому чистые зоны образца разной плотности могут быть сформированы центрифугированием в градиенте плотности. Этот метод подходит для приготовления большого количества образцов нуклеиновых кислот, в которых центрифугирование в градиенте веретена в градиенте хлорида цезия и 2 этилбромида считается предпочтительным методом очистки больших количеств плазмидной ДНК. Хлорид цезия является стандартной средой для центрифугирования в градиенте плотности нуклеиновых кислот. Бромид этидия в градиентном растворе соединяется с нуклеиновой кислотой. Зона нуклеиновой кислоты, образованная после центрифугирования, облучается ультрафиолетовой лампой для получения флуоресценции и обнаружения. Диализ или осаждение этанолом удаляют хлорид цезия с получением очищенной нуклеиновой кислоты.

Manual nucleic acid extraction kit

Оценка методов очистки

PC (P — аббревиатура от английского phenol, C — это аббревиатура от английского хлороформа) метод экстракции / осаждения спиртом — это метод, который никогда не устареет. Стабильно, надежно, экономично и удобно. Экстракция ПК может полностью удалить белки, а осаждение спиртом может удалить соли. Для обычных чистых образцов (примеси — белки) этим методом можно полностью получить высококачественные нуклеиновые кислоты. Хотя при каждой экстракции ПК будет потеряна часть нуклеиновой кислоты (поскольку невозможно удалить всю водную фазу), а низкая концентрация нуклеиновой кислоты спиртом, эффективность осаждения низка, но эти проблемы могут быть решены с помощью рабочих настроек или уменьшения влияние.

Самая большая проблема этого метода в том, что он не подходит для крупномасштабной добычи. Экстракция ПК — очень эффективное средство для удаления белка. Фенол может денатурировать белок, и денатурированный белок отделяется от водной фазы, в феноле или между фазой фенол / вода. Ключом к извлечению ПК является тщательное перемешивание и использование достаточного количества. Тщательное перемешивание может обеспечить достаточный контакт между фенолом и белком и полностью денатурировать белок. Многие люди всегда беспокоятся о том, не вызовет ли сильное смешение повреждений нуклеиновых кислот, особенно геномной ДНК. На самом деле, не нужно быть настолько осторожным.

Операция интенсивного перемешивания частично нарушит геномную ДНК больших молекул, но повреждение не будет настолько сильным, чтобы ДНК превратилась в небольшой фрагмент в пределах 10 килобайт. После энергичного встряхивания и перемешивания большая часть фрагментов геномной ДНК будет больше 20 килобайт. Этот размер, за исключением некоторых особых требований, полностью подходит для ПЦР и рестрикционного расщепления. Если требуемые фрагменты очень большие, например, для создания библиотеки, вы не можете использовать метод интенсивного перемешивания, а только осторожно перевернуть и перемешать взад и вперед.

Ключевым моментом на данном этапе является то, что соотношение раствора для лизиса должно быть достаточно большим, чтобы система не была слишком вязкой. Количество должно быть достаточным, потому что фенол имеет определенную степень насыщения для удаления белка. Если насыщение превышено, белок в системе лизиса не будет удален за один раз, и его необходимо экстрагировать несколько раз, прежде чем его можно будет полностью удалить. Кроме того, недостатком слишком вязкой системы является то, что белок трудно удалить полностью, а геномная ДНК будет разрушена сильнее, поэтому обратите внимание на соотношение лизата к образцу. Центробежная операция 4C способствует более тщательному удалению белка. Другое применение экстракции ПК — использование кислого фенола для частичного удаления ДНК и получения РНК с минимальным остатком ДНК во время экстракции РНК. Однако следует напомнить, что некоторые образцы растений нельзя экстрагировать с помощью ПК до того, как будут удалены некоторые примеси, в противном случае нуклеиновая кислота будет разлагаться.

Метод осаждения белок / спирт с высоким содержанием соли также является очень хорошим методом. По сравнению с методом экстракции ПК этот метод почти преодолевает все недостатки экстракции ПК, за исключением того, что стабильность чистоты может быть ниже. Преимущество более быстрого и легкого удаления белка заключается в том, что его можно использовать для крупномасштабной экстракции, но недостатком является то, что чистота (остаток белка) недостаточно стабильна. Эффективность осаждения белка выше при 4 ° C.

Метод очистки среды — метод, которому уделяется все больше и больше внимания. Его самая большая особенность заключается в том, что он очень подходит для крупномасштабной экстракции нуклеиновых кислот, и, поскольку на него не влияют человеческие факторы, стабильность чистоты высока. Его ахиллесова пята — чрезмерное количество пробы. Среду можно разделить на две категории: первая — тип столбца, то есть среда предварительно заполняется в столбце под ним; другой тип — гранулированный. Операция очистки гранулированной среды мало чем отличается от классического осаждения спиртом. Это процесс добавления жидкости и переливания жидкости несколько раз. После сушки очищенную нуклеиновую кислоту можно получить путем ее растворения.

Хотя операция очистки колонки также включает процесс добавления жидкости и заливки жидкости, потому что добавленная жидкость попадет в другую центрифужную пробирку после центрифугирования, и она полностью отделена от колонки, содержащей нуклеиновую кислоту, поэтому промывка будет более тщательной, а операция более трудосберегающий. Однако стоимость метода очистки среды самая высокая.

Применение иммуномагнитных шариков в области биомедицины

/in /by

Технология иммуномагнитных шариков — это технический метод, появившийся в 1980-х годах. Основываясь на иммунологии, он проник в различные области, такие как патология, физиология, фармакология, микробиология, биохимия и молекулярная генетика. Он все более широко используется в иммуноанализах, разделении клеток, очистке биологических макромолекул и молекулярной биологии.

Структура иммуномагнитных шариков

Магнитные шарики состоят из металлических частиц сердцевины (Fe2O3, Fe3O4), полимерного материала (такого как полистирол, поливинилхлорид), обернутого во внешний слой сердцевины, и внешнего функционального лиганда (такого как -NH2, -COOH, -OH, — СНО) состав.

Применение иммуномагнитных шариков в области биомедицины

Nucleic acid purification magnetic beads NGS screening

1. Сортировка ячеек

Сортировка клеток с помощью иммуномагнитных шариков позволяет отделить очень чистые клетки от сложных смесей клеток в течение нескольких минут. При использовании наноразмерных магнитных шариков для сортировки клеток размер магнитных шариков и их состав делают их биоразлагаемыми, не активируя клетки и не влияя на функцию и жизнеспособность клеток, а физиологические функции клеток также остаются неизменными. Магнитно-меченые клетки можно сразу использовать для анализа и последующих экспериментов.

Сортировку ячеек можно разделить на

a) Положительная сортировка (положительная сортировка): клетки, связанные магнитными шариками, являются клетками, которые необходимо разделить, что подходит для анализа потока и анализа на основе клеток.

б) Отрицательная сортировка (отрицательная сортировка): магнитные шарики связываются с нежелательными клетками, а клетки, свободные в супернатанте, являются желаемыми клетками.

Положительный выбор (слева) и отрицательный выбор (справа) следующие:

1. Важные индикаторы магнитной сепарации ячеек.

Чистота и выход зависят от специфичности моноклонального антитела, связанного с магнитными шариками, и размера (магнитного) магнитных шариков. Однако выход слишком маленьких магнитных шариков невелик, а слишком большие магнитные шарики будут влиять на жизнеспособность клеток и не могут напрямую работать с ними.

2. Разделение и очистка белков / антител.

Применение технологии очистки иммуномагнитных шариков, покрытых антителами (белками), не требует сложного хроматографического оборудования и не ограничивает прозрачность образца. Требуется только простая стадия магнитной адсорбции, чтобы легко отделить моноклональное антитело от продукта экспрессии моноклонального антитела. Эффективно устраняют недостатки традиционной технологии хроматографии.

3. Разделение и очистка нуклеиновых кислот.

Связывание нуклеиновой кислоты с магнитными шариками в основном зависит от электростатических, гидрофобных и водородных связей. ДНК / РНК в клетке или ткани высвобождается под действием раствора для лизиса. В это время поверхностно-модифицированные суперпарамагнитные наномагнитные гранулы из диоксида кремния «специфически связываются» с нуклеиновой кислотой с образованием «комплекса нуклеиновая кислота-магнитная гранула». Затем под действием внешнего магнитного поля комплекс отделяется.

Его можно широко использовать в исследованиях генома в молекулярной биологии, исследованиях молекулярной эволюции, исследованиях генетических заболеваний в медицине, обнаружении мутационных генов, скрининге опухолей, обнаружении ВПЧ, типировании HLA, сопоставлении трансплантации и т. Д., Судебно-биологических образцах Обнаружение пятен крови, мелкие пятна, волосы, окурки и другие доказательства на месте, а также судебное тестирование отцовства, установление кровного родства и т. д. предоставляют доказательства, археология, биологические эксперименты в университетах, средних школах и во многих других областях.

Amino Magnetic Beads

Метод магнитных шариков для извлечения нуклеиновой кислоты:

Традиционный метод экстракции нуклеиновой кислоты Магнитная гранула для экстракции нуклеиновой кислоты
Технически не сложно Высокое качество, высокий выход, высокая производительность
Ручное извлечение Реализуйте автоматизацию процессов
Операция громоздкая, трудоемкая и трудоемкая. Устраняет сложные ручные процедуры экстракции
Не подходит для экстракции нуклеиновых кислот из большого количества образцов. Снижение вреда операторам фенолов, хлороформа и других органических реагентов
Не подходит для клинической молекулярной диагностики В значительной степени соответствуют требованиям сегодняшнего рынка по эффективности экстракции нуклеиновых кислот.

4. Иммуноанализ.

Благодаря небольшому размеру частиц и большой удельной поверхности иммуномагнитные шарики могут улавливать больше аналитов и непосредственно отображать цвет, флуоресценцию или изотопный анализ ферментов на своей поверхности, тем самым обеспечивая высокую скорость обнаружения, высокую специфичность и чувствительность. Высокий воспроизводимый метод иммуноанализа.

5. Другие приложения

В условиях сильного градиента магнитного поля метод иммуномагнитных шариков используется для разделения В- и Т-лимфоцитов в брюшной крови или венах. Затем отделенные лимфоциты широко используются для быстрого отбора доноров и реципиентов для клинической трансплантации органов. Выполните типирование антигена HLA-I типа II.

Технология магнитных шариков как продукт, разработанный объединением междисциплинарных дисциплин, играет огромную роль в биологических и медицинских лабораторных исследованиях. С быстрым развитием секвенирования второго поколения расходные материалы, используемые для секвенирования второго поколения, также открыли его весну.

Будь то магнитные шарики, используемые для извлечения нуклеиновых кислот, или иммуномагнитные шарики, используемые для сортировки клеток и иммуноанализов, они по-прежнему являются подразделением отрасли в области молекулярной биологии, и технология все еще находится в постоянном развитии и развитии. По мере того, как присоединяется все больше и больше компаний, цены на разрабатываемые ими продукты также будут дешеветь.

Как выполнить экстракцию нуклеиновой кислоты

/in /by

Общая трудность экстракции нуклеиновых кислот заключается в сложности извлечения высококачественной РНК из некоторых тканей растений, что связано с богатыми ингредиентами в этих тканях растений, такими как фенольные соединения, полисахариды и некоторые неопознанные вторичные метаболиты. Кроме того, есть ткани, которые богаты повышенной активностью. В интактной клетке эти вещества отделены от нуклеиновых кислот. После разрушения клетки эти вещества будут взаимодействовать с РНК.

Метод экстракции нуклеиновой кислоты:

1. Быстро инактивируйте эндогенную РНКазу, чтобы предотвратить деградацию РНК. Следующие 3 метода могут эффективно инактивировать эндогенную РНКазу:

1) Соберите образец с клеточным лизатом, содержащим хаотропные вещества (например, соль гуанидина), и немедленно гомогенизируйте.

2) Немедленно заморозьте образец жидким азотом. Стоит отметить, что кусочки ткани должны быть достаточно маленькими, чтобы их можно было заморозить в момент погружения в жидкий азот, чтобы обеспечить мгновенную инактивацию РНКазы.

3) Немедленно поместите образец в раствор для хранения образцов РНК, не содержащий азота. Это водный нетоксичный реагент для сбора, который может немедленно стабилизировать и защитить РНК в неповрежденных, незамороженных тканях и образцах клеток. Ключевым моментом является то, что срез образца ткани должен быть достаточно тонким (<0,5 см), чтобы он мог быстро проникнуть в тканевой блок до того, как РНКаза разрушит РНК.

2. Используйте правильные условия хранения клеток или тканей.

После мгновенного замораживания образца жидким азотом его следует хранить при -80 ° C, и его нельзя размораживать. Даже непродолжительное размораживание перед гомогенизацией в лизате, содержащем соль гуанидина, приведет к деградации и потере РНК. Мгновенно замороженные ткани следует измельчить в порошок при сверхнизкой температуре, а затем поместить в раствор для лизиса для гомогенизации.

Manual nucleic acid extraction kit

3. Выберите хороший метод выделения РНК.

Может оказаться трудным выбрать многочисленные доступные методы выделения РНК. Текущий простой и безопасный метод — разделение столбцов. Например, его любят все за простоту в эксплуатации, короткое время и высокую чистоту. Он не требует ДНКазы для переваривания ДНК, что экономит время и позволяет избежать деградации РНК, тем самым увеличивая выход экстракции нуклеиновых кислот; По сравнению с разделением без использования колонок, он чисто удаляет белки и другие примеси, улучшает чистоту и очень подходит для клеток, тканей и обычных растений.

Сложнее выбрать экстракцию растительной нуклеиновой кислоты. На экстракцию РНК растений влияет содержание фенолов, полисахаридов, белковых примесей и вторичных метаболитов. Вы можете выбрать набор для экстракции полисахаридов и полифенолов общей РНК растений (нарцисс, перец, морковь, кукуруза, лилия, пшеница, томаты, цветная капуста, рапс и т. Д.) И наборы для экстракции общей растительной РНК (подходят для экстракции большинства растений, включая : яблоко, виноград, клубника, банан, лонган, личи, газон, сосна, кедр, белая береза, пурпурная шишка, колеус, пуансеттия, олеандр, фикус бенджамина, фиалка, роза, герань, ипомея и др.); Следует отметить, что кровь (включая сыворотку, плазму, спинномозговую жидкость, другие жидкости) извлечение нуклеиновых кислот ТРИЗОЛ и эритроциты Метод лизиса не эффективен. Лизат эритроцитов не содержит ингибиторов РНКаз. В этом процессе РНК легко разрушается. Рекомендуется использовать набор для экстракции общей РНК крови.

Каковы меры предосторожности для системы экстракции нуклеиновых кислот при проведении экспериментов по разделению?

/in /by

Система экстракции нуклеиновых кислот — это высокотехнологичный продукт, в котором для извлечения нуклеиновых кислот используется универсальный метод магнитных шариков. Он обладает такими преимуществами, как высокая степень автоматизации, быстрая скорость извлечения, стабильные результаты и простота эксплуатации. Практически в каждой лаборатории очень важны работы по разделению и очистке биомолекул.

Однако очистить несколько образцов довольно сложно. Не только необходимо выбрать подходящую технологию очистки, но и рабочая нагрузка особенно велика, что трудно удовлетворить текущим быстрым темпам развития потребностей в высокопроизводительной экстракции и очистке проб.

Метод магнитных шариков в системе экстракции нуклеиновых кислот очень подходит для геномных исследований. Независимо от того, являются ли источником извлеченного образца микроорганизмы, животные, растения или вирусы, в сочетании с набором для экстракции геномной ДНК цельной крови, специально оптимизированным для систем экстракции и очистки с помощью магнитных шариков, набором для экстракции генома цельной крови из слоя лейкоцитов и животными реагенты для экстракции геномной ДНК из тканей / клеток Коробка позволяет быстро очистить ДНК или РНК в достаточном количестве и в достаточном количестве.

HERO96 magnetic bead method nucleic acid extraction system

 

На что следует обращать внимание при использовании очистителя нуклеиновых кислот для экспериментов по разделению?

1. Убедитесь в целостности первичной структуры нуклеиновой кислоты.

2. Удалите загрязнения других биологических макромолекул (белковые, углеводные, липидные молекулы).

3. Удалите загрязнения другими молекулами нуклеиновой кислоты (извлеките ДНК и удалите загрязнение РНК).

4. Удалите органические растворители и ионы металлов с высокой концентрацией, которые ингибируют ферменты.

5. Упростите этапы работы и сократите процесс извлечения.

HERO 32 Magnetic Bead Method Nucleic Acid Extraction System

6. Предотвратить разложение нуклеиновой кислоты физическими и химическими факторами (сила сдвига, высокая температура, сильная кислота и сильное основание).

7. Предотвратить деградацию нуклеиновой кислоты биологическими факторами (нуклеазой).

Прибор для очистки нуклеиновых кислот дает стабильные результаты измерений, позволяет избежать различий и ошибок, вызванных ручным управлением, а также имеет хорошую температуру и воспроизводимость. Очиститель может оптимизировать схему очистки в соответствии с реагентами и согласовывать точное время инкубации для достижения более высокой эффективности экстракции. Извлеченная ДНК / РНК имеет высокую чистоту и может использоваться непосредственно для ПЦР и ОТ-ПЦР.

Этот продукт имеет мощную функцию редактирования программ; он может гибко и эффективно определять ваше приложение в соответствии с требованиями различных реагентов. Температуру лизиса и элюирования можно настроить в соответствии с потребностями. Встроенный инженерный компьютер, нет необходимости подключаться к персональному компьютеру; автономная работа экономит больше места и энергии, а также обеспечивает высокостабильную систему автоматического управления.

Базовые магнитные бусины общие вопросы и ответы

/in /by

Магнитные шарики — это недавно разработанная иммунологическая технология. Он сочетает в себе уникальные преимущества лечебных реагентов с высокой специфичностью иммунологической реакции. Основываясь на иммунологии, он проникает в патологию, физиологию, фармакологию, микроорганизмы, биохимию и молекулы. Генетика и другие области, которые все более и более широко используются в иммунологической диагностике, разделении клеток, биологической очистке макромолекул и молекулярной биологии. Общие типы магнитных шариков включают гидроксильные магнитные шарики, амино-магнитные шарики и карбоксильные магнитные шарики. Различные типы магнитных шариков имеют разные проблемы применения. Затем редактор Aisen поделится с вами некоторыми общими вопросами об основных магнитных шариках и ответами на эти вопросы.

Часто задаваемые вопросы о гидроксильных магнитных шариках

1. Какова дисперсия каждого типа магнитных шариков?

70301 Mag OH-500 имеет однородный размер частиц и монодисперсный;

70302 Mag OH-1000 аморфный, неоднородный размер частиц, средний размер частиц 1 микрон, полидисперсный;

70802 Magrose OH сферическая, размер частиц 30-150 мкм, полидисперсная.

2. Какова связывающая способность нуклеиновой кислоты?

Сила связывания превышает 20 мкг ДНК / мг магнитных гранул.

3. Области применения Magrose OH

Модификация поверхности магнитных шариков Magrose OH используется в области очистки белков.

4. Есть ли инструкции по использованию гидроксимагнитных шариков для экстракции нуклеиновых кислот?

Для гидроксильных магнитных шариков требуются разные буферы для экстракции нуклеиновых кислот из разных образцов. Следовательно, нет соответствующих инструкций, и заказчики должны сами выбирать буфер. Если вам нужен подходящий набор, вы можете выбрать соответствующий набор для экстракции нуклеиновых кислот.

Часто задаваемые вопросы об амино-магнитных шариках

1. Метод приготовления 15% раствора глутарового альдегида и вопросы, требующие внимания

Используйте буфер PBS для глутаральдегида, обратите внимание на текущее использование.

2. Как бороться с биологическими лигандами, такими как IgG

IgG получают с буфером PBS. Если есть другие небольшие молекулы, содержащие карбоксильные или аминогруппы, удалите их как можно больше, чтобы избежать конкурирующих реакций с магнитными шариками.

Общие проблемы карбоксильных магнитных шариков

1. Какая степень связывания антител?

Около 2,5-3 мкг / мг магнитных шариков.

2. Какой раствор для хранения магнитных шариков является более подходящим после связывания карбоксильных шариков с IgG?

Консервационный раствор может быть PBST или трис-HCl.

Вышеупомянутое является введением в общие вопросы и ответы на основные магнитные бусины. Различные магнитные шарики всегда будут сталкиваться с различными проблемами в процессе нанесения. Необходимо понимать простые методы и приемы применения различных магнитных шариков, чтобы гарантировать, что магнитные шарики находятся в нормальном состоянии. использовать. Магнитные шарики, производимые Aisen Biotechnology, разнообразны и обладают превосходными характеристиками. Нуждающиеся клиенты могут позвонить для консультации.