Con el repunte de la epidemia de COVID-19, la demanda de pruebas de ácido nucleico ha aumentado drásticamente. Sin embargo, la precisión de los resultados de las pruebas de ácidos nucleicos ha atraído una atención generalizada. La situación de «falta» ha provocado que algunos médicos y el público planteen preguntas sobre la calidad de los kits de prueba. duda. Entonces, ¿cuáles son los factores que pueden afectar la precisión actual de la detección de ácidos nucleicos? Como proveedor profesional de kits de extracción de ácido nucleico, Ascent compartió con nosotros cómo mejorar la precisión de la detección de ácido nucleico COVID-19 a partir de la recolección de muestras, el almacenamiento y transporte de muestras, la extracción de ácidos nucleicos y las pruebas de amplificación.

1. Recogida de muestras

El muestreo correcto es la clave del éxito del experimento. Se entiende que debido a la limitación de la maniobrabilidad, el método de muestreo más común es utilizar hisopos nasofaríngeos, esputo o líquido de lavado alveolar. El método más común es recolectar muestras de hisopos nasofaríngeos. Sin embargo, la técnica de muestreo del hisopo nasofaríngeo afectará la precisión de la prueba. Es mejor que una enfermera capacitada muestre al paciente. Es necesario recolectar suficientes células efectivas de la nasofaringe del paciente. Es posible que las enfermeras sin experiencia no puedan obtener muestras calificadas. .

Además, los hisopos nasofaríngeos y las soluciones de conservación utilizadas para la recolección de muestras también afectarán la calidad y conservación de las muestras recolectadas. Se recomienda utilizar hisopos flocados estériles que puedan absorber y liberar más muestras y libres de ADN libre. La solución de preservación celular de enzima y RNasa puede preservar mejor el ácido nucleico viral y evitar la degradación del ARN de COVID-19.

2. Almacenamiento y transporte de muestras

COVID-19 es un virus de ARN. Se debe prestar especial atención a la temperatura de almacenamiento y el período de tiempo correspondiente durante el almacenamiento y transporte de las muestras para evitar la degradación del ácido nucleico y falsos negativos. Las muestras deben enviarse para su inspección lo antes posible después de la recolección y enviarse al laboratorio dentro de las 2 a 4 horas posteriores a la recolección. Las muestras de sangre deben transportarse a temperatura ambiente y las demás muestras deben transportarse entre 2 ° C y 8 ° C; si el tiempo de transporte excede las 24 horas, las muestras deben almacenarse a -70 ° C o menos, y el transporte a corta distancia debe realizarse entre 2 ° C y 8 ° C. El transporte con hielo seco se utilizará para la transferencia a distancia. Evite la congelación y descongelación repetidas durante el transporte y almacenamiento de la muestra.

3. Extracción de ácidos nucleicos

Las pruebas de ácido nucleico tienen altos requisitos para los laboratorios, el equipo, el personal y los reactivos. Se necesitan particiones especiales de laboratorio de PCR para garantizar la precisión de los resultados de la prueba. La extracción de ácidos nucleicos es un paso crucial en la detección de ácidos nucleicos.

El kit actualmente aprobado solo contiene los reactivos de amplificación necesarios para la detección de ácido nucleico COVID-19 y no contiene reactivos de extracción de ácido nucleico. Puede haber diferencias en la eficiencia de extracción de diferentes reactivos de extracción de ácidos nucleicos o sistemas de extracción de ácidos nucleicos. Se recomienda utilizar métodos de extracción verificados y reactivos de extracción para la extracción de ácido nucleico para garantizar la precisión de los resultados de la prueba.

Para garantizar la seguridad de los inspectores y la pureza y eficiencia de la extracción de ácidos nucleicos, se puede utilizar un método automatizado de extracción de ácidos nucleicos basado en la adsorción de perlas magnéticas. Muchos laboratorios autorizados y expertos relacionados recomiendan utilizar un instrumento de extracción de ácido nucleico semiautomático de tamaño pequeño, colocarlo en un gabinete de seguridad biológica y completar todos los pasos de carga de muestras y extracción de ácido nucleico en el gabinete de seguridad, que es simple y eficiente. y protege la seguridad de los operadores.

4. Detección de amplificación

La detección de ácido nucleico de COVID-19 se dirige principalmente al marco de lectura abierto 1ab (ORF1ab), la proteína de la nucleocápside (N) y la proteína de la envoltura (E) del genoma de COVID-19. Para confirmar que un caso es positivo en el laboratorio, se cumplen las siguientes condiciones: tres objetivos (ORF1ab, N, E) resultados específicos de la prueba de RT-PCR fluorescente en tiempo real en la misma muestra son más de dos (incluidos dos) positivos. Si hay un resultado positivo de la prueba para un solo objetivo, se requiere volver a tomar una muestra y volver a realizar la prueba.

Los resultados negativos no pueden descartar nuevas infecciones por COVID-19. Es necesario descartar los factores que pueden producir falsos negativos, entre ellos: la mala calidad de las muestras, como las muestras respiratorias de la orofaringe y otras partes; especímenes recolectados demasiado pronto o demasiado tarde; almacenamiento y transporte inadecuados y procesamiento de muestras; las razones de la tecnología en sí, como la inhibición de la PCR, etc.

Debido a la grave propagación de la epidemia, el desarrollo de kits de detección de ácido nucleico COVID-19 y la aprobación de emergencia son urgentes. Es posible que no haya suficientes datos de verificación de muestras clínicas en la etapa inicial y existe el riesgo de una sensibilidad y una optimización de la especificidad insuficientes. El rendimiento del reactivo y la tasa de detección positiva de diferentes fabricantes son diferentes. La mayoría de los kits solo detectan los dos objetivos de ORF1ab y el gen N, y los resultados positivos de un solo objetivo de algunos reactivos representan más del 20% de los resultados positivos. Para los resultados positivos de un solo objetivo y los resultados sospechosos, se recomienda utilizar diferentes kits para su revisión o enviar a los CDC para su confirmación, pero aumentará la carga de trabajo y retrasará el tiempo de diagnóstico. De la información pública, los reactivos actualmente aprobados no contienen enzima UNG ni sistema anticontaminación dUTP, y existen riesgos de contaminación y falsos positivos.

Con la creciente popularidad de las pruebas de ácido nucleico para el nuevo coronavirus, las pruebas de ácido nucleico se han arraigado profundamente en los corazones de las personas y se han convertido en el «estándar de oro» para la detección de patógenos. Desde la nueva epidemia de la corona, se ha requerido una gran cantidad de resultados de pruebas de muestra en un corto período de tiempo, y la necesidad de pruebas de ácido nucleico rápidas y eficientes se ha vuelto cada vez más urgente. La extracción de ácidos nucleicos, como paso importante en la detección de ácidos nucleicos, también se enfrenta a requisitos de alto rendimiento y alta eficiencia.

La detección de ácidos nucleicos depende del desarrollo de la tecnología de extracción de ácidos nucleicos. En la actualidad, las principales aplicaciones clínicas de los métodos de extracción de ácidos nucleicos incluyen el método de perlas magnéticas, el método de columna giratoria, el método de ebullición y el método de liberación rápida de ácidos nucleicos. El método de extracción de ácido nucleico con método de perlas magnéticas se ha utilizado ampliamente. Realice el método de extracción automática de ácido nucleico, y el método de extracción automática de perlas magnéticas incluye principalmente extracción de varilla magnética y extracción con pipeta.

1. El principio del método de perlas magnéticas para la extracción de ácidos nucleicos

El método de perlas magnéticas de la tecnología de extracción de ácidos nucleicos es un nuevo tipo de tecnología de extracción de ácidos nucleicos que utiliza perlas magnéticas nanobiológicas como portador. Las moléculas de ácido nucleico pueden reconocer y unirse específicamente a los grupos hidroxilo de silicio en la superficie de las perlas magnéticas, y agregarse o dispersarse bajo la acción de un campo magnético externo. Elimine por completo las operaciones manuales como la centrifugación y la extracción del sobrenadante en el proceso tradicional de extracción de ácidos nucleicos, para realizar el método de extracción y purificación de ácidos nucleicos.

La mayoría de las perlas magnéticas utilizadas en la actualidad tienen una estructura de «núcleo-capa», que utiliza nanopartículas superparamagnéticas como «núcleo», y luego una capa de compuesto orgánico polimérico y una capa de base funcional se envuelven en la superficie del núcleo. Como «caparazón», tiene mejor suspensión en la solución. Se magnetiza en un campo magnético y se acumula bajo la acción de una fuerza magnética. Es muy fácil de separar de los materiales no magnéticos. No hay necesidad de operaciones centrífugas durante la operación.

2. La diferencia de extracción de ácido nucleico por método de perlas magnéticas

La extracción de ácidos nucleicos con perlas magnéticas consta de lisis, unión, lavado, elución y otros pasos. Los reactivos de extracción de ácido nucleico de perlas magnéticas producidos por diferentes fabricantes son diferentes, lo que se refleja principalmente en: (1) diferentes tamaños de perlas magnéticas; (2) Modificación de perlas magnéticas Diferentes métodos; (3) Diferentes métodos de lavado; (4) Diferentes tamaños de muestra.

Las perlas magnéticas tienen un tamaño de partícula pequeño, una gran superficie específica y una fuerte capacidad de captura de ácido nucleico. Se pueden probar en la máquina con perlas magnéticas para mejorar la sensibilidad de detección. El tamaño de partícula es diferente y existen diferentes preferencias por los fragmentos de ácido nucleico de diferentes tamaños. En términos generales, las perlas magnéticas con un tamaño de partícula más grande tienen una mayor capacidad de respuesta magnética y una mayor capacidad para capturar pequeños fragmentos de ácido nucleico. Las perlas magnéticas con un tamaño de partícula más pequeño tienen menor capacidad de respuesta magnética y una mayor capacidad para capturar ácidos nucleicos grandes. Las perlas magnéticas con diferentes tamaños de partículas tienen diferentes áreas de superficie específicas y diferentes capacidades de captura de ácido nucleico. Al mismo tiempo, las perlas magnéticas con un tamaño de partícula más grande tienen un área superficial específica más pequeña y tienen una capacidad ligeramente menor para capturar ácidos nucleicos; Las perlas magnéticas con un tamaño de partícula más pequeño tienen un área de superficie específica más grande y tienen una capacidad ligeramente más fuerte para capturar ácidos nucleicos. El paso de elución afecta directamente el rendimiento de ácido nucleico. Por supuesto, las perlas magnéticas tienen un tamaño de partícula pequeño y una fuerte transmitancia de luz, y también pueden usar perlas magnéticas en la máquina para detectar cuándo no afectan la colección de señales de detección del instrumento de PCR cuantitativa fluorescente (agregue la reacción de PCR durante la elución) Ácido nucleico la detección se lleva a cabo mezclando las perlas magnéticas y detectando el ácido nucleico. Casi no hay pérdida de ácido nucleico. Todos los ácidos nucleicos molde se detectan en la máquina, lo que puede mejorar la sensibilidad de la detección de ácidos nucleicos.

La modificación de la sonda de ácido nucleico dirigida a grupos funcionales mejora aún más la eficiencia de extracción del ácido nucleico dirigido y mejora la sensibilidad de la detección de ácido nucleico dirigido. Los grupos funcionales contenidos en la capa de base funcional de la estructura de la cubierta de la perla magnética son diferentes, y la capacidad de unión específica de la perla magnética y el ácido nucleico es diferente. Los grupos funcionales modificados comúnmente usados ​​son amino (-NH2), carboxilo (-COOH) e hidroxilo (-OH).

Debido a que los grupos funcionales son diferentes, los tampones de unión utilizados también son diferentes. El grupo hidroxilo es negativo y alcalino, y puede existir de forma estable en soluciones alcalinas, mientras que el grupo carboxilo es ácido y puede existir de forma estable en soluciones ácidas. El método de modificación de la sonda de ácido nucleico dirigida al grupo funcional puede mejorar la capacidad de unión específica de la secuencia de ácido nucleico dirigida y mejorar aún más la eficacia de la extracción de ácido nucleico.

Cuantos menos tiempos de lavado, menor pérdida de ácido nucleico y mayor rendimiento de ácido nucleico. En términos generales, cuantos más tiempos de lavado, mayor es la posibilidad de pérdida de ácido nucleico y menor puede ser el rendimiento de ácido nucleico. Cuantos más pasos afecten a la estabilidad de la extracción automatizada de ácidos nucleicos, más difícil será lograr la automatización.

Aumente el tamaño de la muestra y mejore la sensibilidad de la detección de ácidos nucleicos. El aumento del tamaño de la muestra también es la práctica habitual de algunos fabricantes. Por ejemplo, los kits de detección cuantitativa de ácidos nucleicos del virus de la hepatitis B de Roche Diagnostics y Abbott Diagnostics pueden lograr el propósito de la detección de alta sensibilidad aumentando el tamaño de la muestra y la concentración de ácido nucleico, y su sensibilidad puede llegar a 10 UI / ml.

En resumen, el método de la tecnología de extracción de ácidos nucleicos con perlas magnéticas es actualmente la tecnología de extracción de ácidos nucleicos clínicamente automatizada más utilizada en el mercado, y juega un papel principal en la prevención y el control de la nueva epidemia de coronavirus. Los reactivos de extracción de ácido nucleico del método de perlas magnéticas producidos por diferentes fabricantes tienen diferentes métodos de lisis de ácidos nucleicos, capacidad de unión de perlas magnéticas, métodos de lavado y métodos de elución. Solo la eficacia de la lisis del ácido nucleico es lo suficientemente alta, la capacidad de unión específica de la perla magnética es lo suficientemente fuerte y el número de lavados es suficiente. Solo una pequeña cantidad y una eficacia de elución suficientemente alta (o la elución del ácido nucleico de la muestra original) pueden garantizar una mayor eficacia de extracción de ácidos nucleicos, y se puede garantizar que una detección de ácidos nucleicos de alta sensibilidad o hipersensibilidad sea mejor. La estabilidad de la extracción automatizada de ácidos nucleicos.

Con el rápido desarrollo de la biotecnología, con la aplicación de la tecnología de PCR en varios campos, incluida la detección de enfermedades médicas, la detección de modificaciones genéticas agrícolas y muchas otras aplicaciones, la extracción de ácidos nucleicos de muestras de alto rendimiento se ha vuelto extremadamente urgente y muchas empresas han lanzado Con el instrumento de extracción automática de ácido nucleico, existen varios principios. Cómo elegir un instrumento de extracción automática de ácido nucleico adecuado requiere un análisis detallado.

Desde la perspectiva del principio de extracción, existen el método de columna de giro y el método de perlas magnéticas. El sistema de extracción automática de ácido nucleico del método de columna centrífuga utiliza una centrífuga y un dispositivo de pipeteo automático para combinar el método. El rendimiento es generalmente de 1 a 12 muestras. El tiempo es similar al de la extracción manual. No mejora la eficiencia y el precio no es barato. No universal, apto para laboratorios con fondos suficientes.

El sistema automático de extracción de ácido nucleico del método de perlas magnéticas se divide en el método de varilla magnética y el método de succión. Primero, el método de succión. Como su nombre indica, el método de succión se lleva a cabo mediante un dispositivo de pipeteo automático, y la solución de lisis y las perlas magnéticas se agregan a través del dispositivo de pipeteo automático. Adsorción, aspirar el lisado, agregar la solución de enjuague, adsorción de perlas magnéticas, aspirar la solución de enjuague y agregar el tampón de elución.

Parece que no hay ningún problema con los pasos, pero el mayor problema con el método de succión es que para no quitar las perlas magnéticas al eliminar el líquido de desecho, la pipeta no debe estar demasiado cerca de las perlas magnéticas para evitar las perlas magnéticas. y que el líquido residual sea succionado. Siempre hay una pequeña parte del líquido residual que no se puede eliminar por completo cada vez, especialmente el dispositivo con el imán en la parte inferior. Debido a que el imán adsorbe las perlas magnéticas hasta el fondo, la pipeta no puede estar demasiado cerca del fondo, por lo que la solución de enjuague no puede eliminarse por completo. La eliminación, la sal residual y el etanol en la solución de enjuague afectarán la eficacia de elución posterior y la tasa de éxito de la PCR; el imán en el costado del dispositivo tendrá menos líquido residual, pero la eficiencia de elución no es buena, dependiendo del ADN para disolverse en el lavado. En la solución sin tampón, a menos que espere más de media hora, por lo que en unas 96 estaciones de trabajo de extracción automática de ácido nucleico, el tiempo de ciclo de extracción toma 150 minutos y el método de 32 imanes puede tomar 5 rondas al mismo tiempo. .

Hablemos del sistema de extracción de ácido nucleico con método de varilla magnética. El flujo suele tener 8, 16, 32, 96 canales. En comparación con el método de succión, la ventaja del método de varilla magnética es que el líquido en cada paso no se queda, porque la varilla magnética solo quita las perlas magnéticas y las transfiere. Vaya al pozo de reacción correspondiente en el siguiente paso. Además, el instrumento de extracción del método de varilla magnética debe ser más completo, como el calentamiento, y cada tanque de calentamiento debe tener una temperatura controlada de forma independiente, de modo que se pueda configurar el calentamiento, la lisis y la elución. Diferentes temperaturas, otro punto muy importante es que el motor que acciona la varilla magnética debe ser capaz de accionar la varilla magnética para mezclar y agitar rápidamente el líquido, a fin de facilitar la automatización y ayudar a la lisis y enjuague a fondo.

La selección de flujo del método de barra magnética es mejor elegir 32 canales. Los 96 canales parecen tener un flujo más alto, pero hay un problema muy práctico. Cuando se transfieren 96 barras magnéticas de una placa a otra, las barras magnéticas están en la parte superior. Qué hacer si el líquido cae a la mitad, goteará en otros orificios y causará contaminación, y la varilla magnética de 32 canales no atraviesa el cielo por encima de otras muestras, por lo que no habrá contaminación cruzada.

Lo anterior es la introducción relevante sobre la selección del sistema de extracción de ácidos nucleicos, pero muchas personas todavía son fáciles de caer en el malentendido de la selección. Los siguientes ejemplos ilustran los dos malentendidos más comunes:

Malentendido 1: La diferencia entre el sistema de extracción de ácido nucleico y la estación de trabajo y el malentendido de la selección

Muchos fabricantes de estaciones de trabajo a menudo les dicen a sus clientes cuando promocionan sus estaciones de trabajo que el sistema de extracción de ácidos nucleicos es completamente automático, mientras que el sistema de extracción de ácidos nucleicos es semiautomático. Los clientes también piensan subjetivamente que la estación de trabajo puede pipetear, extraer y hacer cualquier cosa, como si simplemente pusieran la muestra. Entra, puedes obtener el ácido nucleico que deseas sin preocuparte por nada. Cuando la estación de trabajo está en su lugar, resulta que la situación real no es así. No solo no es tan bueno como se esperaba, sino que incluso la extracción de ácido nucleico básico es difícil. Entonces, cual es la razon? ?

La primera pregunta es el problema de abrir la tapa. Las estructuras de la tapa de los tubos de extracción de sangre, los tubos de almacenamiento de saliva y los tubos de crioconservación de código bidimensional son diferentes, los tamaños son diferentes y los fabricantes son diferentes. ¿Cómo abrir la tapa automáticamente en la estación de trabajo? Este problema ya no está resuelto.

El segundo problema es la entrada de códigos de barras, códigos de barras y códigos QR, así como algunas etiquetas adheridas manualmente y etiquetas escritas a mano, por lo que el escaneo de códigos sigue siendo manual, lo cual es difícil de automatizar.

El tercer problema es que la adición de líquido está automatizada. La estación de trabajo puede agregar reactivos automáticamente, lo que parece ser una ventaja, pero se necesitan entre 15 y 30 minutos para agregar una placa de 96 pocillos profundos, y la extracción generalmente requiere seis reactivos, es decir, seis placas. Tarda aproximadamente 1,5 horas. Muchos reactivos de extracción contienen una alta concentración de etanol. Durante tanto tiempo, la concentración de etanol cambiará, lo que afectará la eficiencia y sensibilidad de la extracción. Además, muchos fabricantes de instrumentos de extracción tienen kits preinstalados que no es necesario agregar. líquido.

Malentendido 2: la diferencia entre productos importados y nacionales, este es el mayor malentendido de elección

Mucha gente elige un sistema de extracción de ácido nucleico basado en el pensamiento habitual y piensa que los importados son mejores que los nacionales; sin embargo, los extractores de ácidos nucleicos son equipos orientados a la aplicación, no equipos experimentales básicos, no el tipo de equipo que se puede utilizar cuando están conectados. La extracción de ácidos nucleicos requiere la cooperación general de instrumentos, kits de apoyo y programas de aplicación. Los fabricantes deben seleccionar los kits y procedimientos de extracción más adecuados según el tipo de muestra. A menudo es necesario optimizar los reactivos y los procedimientos. Sin el soporte técnico del fabricante, no puede usarlo. . Esto explica bien por qué muchas estaciones de trabajo e instrumentos de extracción importados no son utilizados colectivamente por nadie; el apoyo técnico de los instrumentos importados no puede mantenerse al día, y las visitas técnicas de los instrumentos importados requieren costosas tarifas de puerta a puerta, y no hay garantía de que puedan utilizarse. Ayude a los clientes a optimizar el plan experimental (por supuesto, se debe cobrar la tarifa de puerta a puerta).

En general, la mayoría de los sistemas de extracción de ácido nucleico no pueden mantenerse al día con los fabricantes nacionales en términos de conveniencia del sistema operativo de instrumentos, sensibilidad y rendimiento de extracción de instrumentos, kits de instrumentos, capacidades de personalización y actualización de instrumentos, etc., y los cargos por servicio posventa son uniformes. más frustrante. No es necesario demostrar la superioridad de las importaciones. A través de la discusión anterior, debemos tener claro que al elegir un sistema de extracción de ácidos nucleicos, lo mejor es realizar una investigación o prueba completa, para no caer en la situación pasiva de comprar un sistema de extracción de ácidos nucleicos.

La tecnología de perlas inmunomagnéticas es un método técnico que apareció en la década de 1980. Basado en la inmunología, ha penetrado en diversos campos como patología, fisiología, farmacología, microbiología, bioquímica y genética molecular. Se ha vuelto cada vez más utilizado en inmunoensayos, separación celular, purificación de macromoléculas biológicas y biología molecular.

Estructura de perlas inmunomagnéticas

Las perlas magnéticas están compuestas por partículas de metal del núcleo (Fe2O3, Fe3O4), un material polimérico (como poliestireno, cloruro de polivinilo) envuelto en la capa exterior del núcleo y el ligando funcional más externo (como -NH2, -COOH, -OH, – CHO) composición.

Aplicación de perlas inmunomagnéticas en el campo de la biomedicina

1. Clasificación de células

La clasificación de células de perlas inmunomagnéticas puede separar células de muy alta pureza de mezclas de células complejas en unos pocos minutos. Cuando se utilizan perlas magnéticas a nanoescala para la clasificación celular, el tamaño de las perlas magnéticas y su composición lo hacen biodegradable sin activar las células ni afectar la función y vitalidad de las células, y las funciones fisiológicas de las células tampoco se modifican. Las células marcadas magnéticamente se pueden utilizar inmediatamente para análisis y experimentos posteriores.

La clasificación de células se puede dividir en

a) Clasificación positiva (clasificación positiva): las células unidas por perlas magnéticas son las células que se van a separar, lo que es adecuado para el análisis de flujo y el análisis basado en células.

b) Clasificación negativa (clasificación negativa): las perlas magnéticas se unen a células no deseadas y las células libres en el sobrenadante son las células deseadas.

La selección positiva (izquierda) y la selección negativa (derecha) son las siguientes:

1. Indicadores importantes para la separación magnética de células

La pureza y el rendimiento dependen de la especificidad del anticuerpo monoclonal conectado a las perlas magnéticas y del tamaño (magnético) de las perlas magnéticas. Sin embargo, el rendimiento de perlas magnéticas que son demasiado pequeñas no es alto, y las perlas magnéticas que son demasiado grandes afectarán la viabilidad celular y no pueden directamente aguas arriba.

2. Separación y purificación de proteínas / anticuerpos

La aplicación de la tecnología de purificación de perlas inmunomagnéticas recubiertas de anticuerpos (proteína) no requiere un equipo de cromatografía complicado y no tiene ninguna limitación en la claridad de la muestra. Solo requiere un simple paso de adsorción magnética para separar fácilmente el anticuerpo monoclonal del producto de expresión del anticuerpo monoclonal. Resuelva eficazmente las deficiencias de la tecnología de cromatografía tradicional.

3. Separación y purificación de ácidos nucleicos

La unión de ácido nucleico a perlas magnéticas se basa principalmente en enlaces electrostáticos, hidrófobos y de hidrógeno. El ADN / ARN de la célula o tejido se libera bajo la acción de la solución de lisis. En este momento, las perlas nanomagnéticas de sílice superparamagnéticas modificadas en la superficie «se unen específicamente» con el ácido nucleico para formar un «complejo ácido nucleico-perlas magnéticas». Luego, bajo la acción de un campo magnético externo, el complejo se separa.

Puede ser ampliamente utilizado en la investigación del genoma en biología molecular, investigación de evolución molecular, investigación de enfermedades genéticas en medicina, detección de genes de mutación, detección de tumores, detección de VPH, tipificación de HLA, compatibilidad de trasplantes, etc., muestras biológicas forenses La detección de manchas de sangre, las manchas finas, el cabello, las colillas de cigarrillos y otras pruebas in situ, y las pruebas judiciales de paternidad, la identificación de parentesco consanguíneo, etc. proporcionan pruebas, arqueología, experimentos biológicos en universidades, escuelas intermedias y muchos otros campos.

Método de perlas magnéticas para extraer ácido nucleico:

Método tradicional de extracción de ácidos nucleicos	Extracción de perlas magnéticas de ácido nucleico
No es técnicamente difícil	Alta calidad, alto rendimiento, alto rendimiento.
Extracción manual	Realice la automatización de procesos
La operación es engorrosa, lenta y laboriosa.	Elimina los complicados procedimientos de extracción manual
No apto para la extracción de ácidos nucleicos de una gran cantidad de muestras	Reducir el daño de los fenoles, cloroformo y otros reactivos orgánicos a los operadores
No apto para diagnóstico clínico molecular	Cumplir en gran medida con los requisitos del mercado actual para la eficiencia de extracción de ácidos nucleicos

4. Inmunoensayo

Debido a su pequeño tamaño de partícula y gran área de superficie específica, las perlas inmunomagnéticas pueden capturar más analitos y realizar directamente el color de la enzima, la fluorescencia o la visualización de isótopos en su superficie, estableciendo así una serie de alta velocidad de detección, alta especificidad y sensibilidad. Método de inmunoensayo alto y reproducible.

5. Otras aplicaciones

Bajo un campo magnético de alto gradiente, el método de perlas inmunomagnéticas se usa para separar los linfocitos B y T en la sangre o las venas abdominales. Los linfocitos separados se utilizan ampliamente en la selección rápida de donantes y receptores de trasplantes de órganos clínicos. Realice la tipificación del antígeno HLA-I tipo II.

La tecnología de perlas magnéticas, como producto desarrollado por la convergencia de temas interdisciplinarios, juega un papel muy importante en las pruebas de laboratorio biológicas y médicas. Con el rápido desarrollo de la secuenciación de segunda generación, los consumibles involucrados en la secuenciación de segunda generación también marcaron el comienzo de su primavera.

Ya se trate de perlas magnéticas utilizadas para extraer ácidos nucleicos o perlas inmunomagnéticas utilizadas en la clasificación celular y los inmunoensayos, siguen siendo una subdivisión de la industria en el campo de la biología molecular, y la tecnología todavía está en continuo progreso y desarrollo. A medida que se unan más y más empresas, los precios de los productos desarrollados por ellas también serán más baratos.

El sistema de extracción de ácidos nucleicos es un producto de alta tecnología que utiliza el método universal de perlas magnéticas para extraer ácidos nucleicos. Tiene las ventajas de alta automatización, rápida velocidad de extracción, resultados estables y fácil operación. En casi todos los laboratorios, el trabajo de separación y purificación relacionado con las biomoléculas es muy importante.

Sin embargo, es bastante difícil purificar varias muestras. No solo es necesario seleccionar una tecnología de purificación adecuada, sino que también la carga de trabajo es particularmente grande, lo que es difícil de satisfacer el rápido desarrollo actual de las necesidades de purificación y extracción de muestras de alto rendimiento.

El método de perlas magnéticas del sistema de extracción de ácidos nucleicos es muy adecuado para la investigación genómica. Independientemente de si la fuente de la muestra extraída son microorganismos, animales, plantas o virus, combinado con un kit de extracción de ADN genómico de sangre total especialmente optimizado para sistemas de extracción y purificación de perlas magnéticas, un kit de extracción de genoma de sangre completa de capa de glóbulos blancos y reactivos de extracción de ADN genómico de tejidos / células La caja puede purificar rápidamente ADN o ARN en cantidad y pureza suficientes.

 

¿A qué debemos prestar atención cuando utilizamos un purificador de ácido nucleico para experimentos de separación?

1. Asegure la integridad de la estructura primaria del ácido nucleico.

2. Eliminar la contaminación de otras macromoléculas biológicas (proteínas, carbohidratos, moléculas lipídicas).

3. Elimine la contaminación de otras moléculas de ácido nucleico (extraiga el ADN y elimine la contaminación por ARN).

4. Elimine los disolventes orgánicos y los iones metálicos de alta concentración que inhiben las enzimas.

5. Simplifique los pasos de la operación y acorte el proceso de extracción.

6. Prevenir la degradación del ácido nucleico por factores físicos y químicos (fuerza de corte, alta temperatura, ácido fuerte y base fuerte).

7. Prevenir la degradación del ácido nucleico por factores biológicos (nucleasa).

El instrumento de purificación de ácido nucleico tiene resultados de medición estables, evita diferencias y errores causados ​​por la operación manual y tiene buena temperatura y repetibilidad. El purificador puede optimizar el esquema de purificación de acuerdo con los reactivos y cooperar con el tiempo de incubación preciso para lograr una mayor eficiencia de extracción. El ADN / ARN extraído tiene una alta pureza y se puede usar directamente para PCR y RT-PCR.

Este producto tiene una potente función de edición de programas; puede definir su aplicación de manera flexible y eficiente para cumplir con los requisitos de diferentes reactivos. La temperatura de lisis y elución se puede personalizar según las necesidades. Computadora de ingeniería incorporada, no es necesario conectarse a una computadora personal; El funcionamiento autónomo ahorra más espacio y energía y proporciona un sistema de control automático muy estable.