常用的传染病化验检查包括微生物培养、病毒分离、核酸检测、抗体检测等。核酸检测也是检测病毒的方法，它可以更早发现感染。现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测，可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染，以及推测是否具有传染性。季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份，从而判断被检测者是否属于感染者。那么，核酸核酸检测的准确率有多高呢？

目前还没有确切的大样本统计数据证明核酸检测的准确率，但影响准确率的因素比较多，例如检测试剂的质量水平、受检测人员感染时间（过早或者过晚都会降低准确率）、标本取材时受检测者配合情况（配合度差可能导致标本没有取到位）以及检验人员的操作熟练程度等。

如果核酸检测的各个环节都能准确无误，理想状态下核酸检测准确率可以达到95%以上。但是由于各种原因，会出现假阴性的结果。所谓假阴性，就是指受测试者确实是感染者，但是核酸检测结果却为阴性，这就是假阴性。随着技术水平提高，各个医疗机构的准确率都在迅速提高，假阴性率正在不断降低。

另外，对于和确诊病例、疑似病例有过密切接触的人员，通常需要两次核酸检测才能排除。对于去过新冠病毒中高风险地区的人员，如果出现发热和呼吸道症状，一次核酸检测阴性存在假阴性可能，所以也需要两次核酸检测才能排除。除此之外，如果医生判断一次核酸检测阴性仍不能排除的，也需要再次检测核酸，有时候医生还会建议做胸部CT、血常规化验和新冠病毒的血清抗体检测来判断是否感染。

随着基因诊断、转基因食品检测、个性化医疗等的快速发展，现在的核酸提取技术已经不能够满足当今生物技术的需要，急需能够高通量、自动化的核酸提取方法。在这种背景下，磁珠法核酸提取应运而生。

磁珠用于DNA提取是其生物学价值最大化的领域之一，主要使用的微球种类包括硅羟基磁珠和oligo磁珠。带有表面基团的磁珠能与检测样本中释放的核酸进行特异性可逆结合。同时利用磁珠自身具备的磁响应能力，在外加磁场的作用下进行定向移动与富集，从而实现对核酸的分离纯化。磁珠法核酸提取主要的优点包括操作简单自动化、可大批量操作、用时短。

1、什么是磁珠

磁珠是一类特殊的纳微米材料，它们的尺寸通常在零点几微米到几微米之间，仅为一根头发丝直径的十几分之一到几十分之一，肉眼是无法观测到单个磁珠的。它们具有超顺磁性，在磁场中可以向一侧迅速移动，聚集在一起，而去除磁场后又能够迅速恢复到分散状态。

用于核酸提取的磁珠表面具有特定的性质，在某些条件下能够将病毒核酸吸附在表面，在另一些条件下又能将病毒核酸从表面释放下来，用于后续的检测步骤。

2、磁珠法核酸提取的原理

核酸结合到磁珠上主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。细胞或组织在裂解液作用下，其中的DNA/RNA被释放出来。此时经过表面修饰的超顺磁性氧化硅纳米磁珠即与核酸进行”特异性结合”，形成“核酸-磁珠复合物”。然后在外加磁场的作用下，复合物即分离出来。经过洗脱液洗去非特异性吸附的杂志、去盐、纯化后，即得到欲提取的核酸物质。

依据与硅胶膜离心柱相同的原理，运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性，在Chaotropic盐（盐酸胍、异硫氰酸胍等）和外加磁场的作用下，能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA，可应用在临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。

事实上，由于检测机构每天需要处理大量样本，大都是采用自动化核酸提取仪配套磁珠法核酸提取试剂盒的方式进行核酸提取步骤。

随着生物医学的不断发展，核酸提取技术也在更新换代，磁珠法核酸提取作为新型核酸提取技术，能够高通量、自动化提取核酸，满足当今生物技术的需要。另外，磁珠法核酸提取的步骤较为简单，操作方便，受到好评。下面，爱森小编为大家分享一下磁珠法核酸提取步骤及原理吧。

磁珠法核酸提取步骤

1、每支40mg规格的蛋白酶K干粉中加入1 mL去离子水至终浓度40mg/mL，每支20mg规格的蛋白酶K干粉中加入500 μL去离子水至终浓度40mg/mL，颠倒混匀十次使其完全溶解，短期使用可于4℃保存，长期储存请置于-20℃，反复冻融不得超过五次。

2、组织样本取10~30 mg液氮研磨至细粉状，转移到1.5 mL离心管中，加入200 μL 1 X PBS缓冲液重悬，然后进行下一步操作。液体样本直接进行下一步操作。

3、取500μL的病毒裂解液VL加到1.5mL的无酶离心管中，然后加入25μL蛋白酶K和25μL的病毒磁珠(加入前摇匀)，再加入200μL的血清/血浆/组织匀浆液样本，涡旋振荡混匀，55%C水浴20min，期间每隔5min颠倒混匀10s。

4、取出水浴的无酶离心管，放置到磁力架上，磁吸90s使磁珠完全吸附，用移液器小心吸弃上清(注意不要吸到管底的磁珠)。

5、从磁力架上取下离心管，加入700μL的漂洗液BufferA ，吹打混匀或者涡旋混匀30s ，使磁珠重悬，然后将离心管放置到磁力架上，磁吸90S使磁珠完全吸附，用移液器小心吸弃上清。

6、取700μL的漂洗液BufferB，加到离心管中，尽量不要吹散磁珠，然后直接吸弃上清。

7、加入80μL的洗脱缓冲液，取下离心管，56℃水浴5min，期间涡旋3-4次，使核酸从磁珠上洗脱下来。

8、把离心管放置到磁力架上磁吸60s，将液体转移至一个新的1.5mL的无酶离心管中，直接进行下游实验或-20℃保存。

磁珠法核酸提取原理

其原理主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。细胞或组织在裂解液作用下，其中的D NA/RNA被释放出来。此时经过表面修饰的超顺磁性氧化硅纳米磁珠即与核酸进行“特异性结合”，形成“核酸-磁珠复合物”。然后在外加磁场的作用下，复合物即分离出来。然后经过洗脱液洗去非特异性吸附的杂质、去盐、纯化后，即得到欲提取的核酸物质。

上述即是磁珠法核酸提取步骤及原理相关介绍，爱森生物科技生产的磁珠及核酸提取系统性能优异，质量可靠，欢迎有需要的客户致电咨询。

使用生物磁珠提取核酸，是一种新颖的核酸提取方式，相比于传统的氯仿、异戊醇抽提法和离心柱试剂盒法，这种方法还有很多人不慎了解，在使用磁珠法提纯核酸的过程中，也存在着一些误区。

误区一、磁珠越多，提取效果越好

有人觉得在提取效果不佳的时候，增加磁珠的用量，认为磁珠多加一点，就能吸上更多的核酸，其实这种想法是不可取的。

磁珠的主要特点是既可以分散于液体中，也可以在外加磁场作用下以固态方式和液相分离，任何试剂体系，磁珠和液体的比例都应该是有一定数值的，超过一定的比例，过多的磁珠将因为无法均匀分散于液体中，而丧失其分散的特性，也使得洗涤过程中无法充分增加核酸磁珠和液体接触的效率。

而过量的磁珠也会吸附更多的杂质，对于除杂的效果影响非常大。甚至有些时候，过多的磁珠会吸附蛋白酶、溶菌酶等在液体体系中起主要作用的功能成分，导致整个试剂盒效率低下。有很多时候，在提取效果不佳的时候，减少磁珠使用量，反而是提升提取效果的最优途径。

通常情况下，磁珠法试剂盒给出的参考磁珠用量都是略微过量的，因此需要增加磁珠用量改善吸附效率的情况并不多，但如果确定是磁珠用量不足导致的提取效果不好，是可以在一定范围内通过增加磁珠用量来改善提取效果的。

误区二、试剂使用的越多，提取效果越好

但是对于磁珠法而言，每增加一部分液体体积，就减少了更多的磁珠碰撞几率，而降低磁珠碰撞几率，会导致吸附率的大幅度下降。所以很多时候，虽然增加裂解液和洗涤液确实能够起到增强裂解和增强洗涤的作用，但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率，无法保证磁珠碰撞效率是不能保证核酸提取效率的，所以单纯增加试剂使用量改善提取效果并不一定完全有效。

误区三、洗涤次数越多，提取效果越好

提取得到的核酸杂质过多时，使用者会考虑多进行几次洗涤，以得到更为纯净的核酸。增加洗涤次数确实有利于提纯核酸，但考虑到每次洗涤都会损失一定量的核酸，且增加了核酸断裂水解的可能性，所以一般来说洗涤次数控制在2~4次为宜。

误区四、样本取用的越多，提取效果越好

在样本不够新鲜或者核酸含量本身就很少的情况下，往往核酸提取效果不好，很多老师就会采用多取样本的方式增加核酸提取量。

但简单地增加样本取样量，有时会引入过多的杂质，超出裂解液裂解能力，也会使提取效率降低，所以并不推荐通过简单的增加样本取样量的方式来达到增加提取量的目的。

如果确实是由于样本量不足而引起的提取量过低，建议在前处理先经过富集或者浓缩步骤再开始提取。或者增加裂解的完全性，使更多的核酸暴露出来也是一种解决方法。

误区五、某一种磁珠好，就应该在所有试验中效果都好

磁珠的种类是多种多样的，粒径大小不同，分散性不同，磁响应时间不同，包被基础基质不同，外层修饰官能团不同，包被密度不同，官能团臂长不同，会导致磁珠特性千差万别。

所以不同磁珠所适应的实验和体系也是不同的。就像同样是核酸提取的试剂，配方也并不完全相同，同样应用于核酸提取的磁珠，性质也并非完全一致。

有的磁珠在常量核酸提取中表现出了更高的吸附效率，有的磁珠更适用于微量核酸提取。有的磁珠适合偏酸性系列的试剂体系，有的磁珠适合偏碱性系列的试剂体系。有的磁珠磁响应性好但是沉降速度快，更适合磁棒式自动提取仪;有的磁珠沉降速度慢但是磁响应时间长，更适合移液式自动提取仪。

很少有一种磁珠能适用于所有实验的情况，除了固定的试剂盒配合，多数情况下，磁珠和试剂体系都要做一定时间的配合调整。

误区六、和某种试剂盒对比效果不好，就是磁珠不好

很多客户在筛选磁珠过程中都是在已经成熟试剂体系下，简单地等量替换磁珠，用于比较磁珠效果。

这样就会很容易得出某种磁珠效果不好的结论，但实际上，由于不同磁珠适合的体系和用量是不同的，往往需要调整过后才能获得更好的提取效果。

核酸提取试剂盒是生物科学和纳米材料科学二者合一的高新技术产品，是核酸提取纯化技术的一次大的突破。随着基因诊断、转基因食品检测、个性化医疗等的快速发展，现在的核酸提取技术已经不能够满足当今生物技术的需要，急需能够高通量、自动化的核酸提取方法。在这种背景下，核酸提取试剂盒（磁珠法）应运而生。下面，爱森小编为大家介绍一下核酸提取试剂盒主要成分有哪些吧。

　　1、十二烷基硫酸钠

十二烷基硫酸钠是一种有机物，白色或淡黄色粉末，溶于水，对碱和硬水不敏感。具有去污、乳化和优异的发泡力，是一种对人体微毒的阴离子表面活性剂，其生物降解度>90%。

它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构，使蛋白质变性，在高温下可以破坏蛋白质与核酸的结合，促进核酸释放。

　　2、乙基苯基聚乙二醇

乙基苯基聚乙二醇简称NP-40，是一种很温和的非离子型去垢剂，常应用于细胞裂解、蛋白处理、组化处理、杂交洗涤等。1%浓度基本可以破坏掉细胞膜，而对核膜的破坏作用较弱。

　　3、弱阳离子螯合树脂

弱阳离子螯合树脂是一种由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成的化学螯合树脂，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，可螯合多价离子，特别是对高价金属离子有很高的亲和力和螯合作用。在低离子强度、碱性及煮沸的条件下，可以使细胞膜破裂，并使蛋白质变性，通过离心除去Chelex颗粒，使其结合的物质与DNA分离。

　　4、蛋白酶K

是一种从白色念珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶，具有很高的比活性，是DNA提取的关键试剂。DNA提取中，主要作用是酶解与核酸结合的组蛋白，使DNA游离在溶液中。

　　5、聚乙二醇辛基苯基醚

聚乙二醇辛基苯基醚简称曲拉通X-100，是一种非离子表面活性剂，在水中不解离,在溶液中稳定性高，不易受强电解质无机盐类的影响，能与生物膜中的磷脂等脂质结合形成可溶性复合物；疏水端也能与膜蛋白的疏水区结合形成复合物，溶解于溶液中。

　　6、异硫氰酸胍

异硫氰酸胍是强用力的蛋白质变性剂，能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离。

　　7、乙二胺四乙酸

乙二胺四乙酸是一种有机化合物，常温常压下为白色粉末。它是一种能与二价金属离子结合的螯合剂。由于多数核酸酶类和有些蛋白酶类的作用需要二价金属离子，故常用做核酸酶、蛋白酶的抑制剂；也可用于去除重金属离子对酶的抑制作用。

上述即是核酸提取试剂盒主要成分相关介绍。核酸提取试剂盒采用磁珠吸附DNA/RNA的方法达到快速纯化DNA/RNA的目的，而上述化学成分在此过程中都有重要作用。爱森生物科技设计生产的磁珠法核酸提取试剂盒质量可靠，使用方便，效果出色，欢迎有需要的客户致电咨询。