¿Cómo elegir un sistema de extracción de ácido nucleico adecuado y cuáles son los malentendidos en la selección?

Con el rápido desarrollo de la biotecnología, con la aplicación de la tecnología de PCR en varios campos, incluida la detección de enfermedades médicas, la detección de modificaciones genéticas agrícolas y muchas otras aplicaciones, la extracción de ácidos nucleicos de muestras de alto rendimiento se ha vuelto extremadamente urgente y muchas empresas han lanzado Con el instrumento de extracción automática de ácido nucleico, existen varios principios. Cómo elegir un instrumento de extracción automática de ácido nucleico adecuado requiere un análisis detallado.

Desde la perspectiva del principio de extracción, existen el método de columna de giro y el método de perlas magnéticas. El sistema de extracción automática de ácido nucleico del método de columna centrífuga utiliza una centrífuga y un dispositivo de pipeteo automático para combinar el método. El rendimiento es generalmente de 1 a 12 muestras. El tiempo es similar al de la extracción manual. No mejora la eficiencia y el precio no es barato. No universal, apto para laboratorios con fondos suficientes.

El sistema automático de extracción de ácido nucleico del método de perlas magnéticas se divide en el método de varilla magnética y el método de succión. Primero, el método de succión. Como su nombre indica, el método de succión se lleva a cabo mediante un dispositivo de pipeteo automático, y la solución de lisis y las perlas magnéticas se agregan a través del dispositivo de pipeteo automático. Adsorción, aspirar el lisado, agregar la solución de enjuague, adsorción de perlas magnéticas, aspirar la solución de enjuague y agregar el tampón de elución.

Parece que no hay ningún problema con los pasos, pero el mayor problema con el método de succión es que para no quitar las perlas magnéticas al eliminar el líquido de desecho, la pipeta no debe estar demasiado cerca de las perlas magnéticas para evitar las perlas magnéticas. y que el líquido residual sea succionado. Siempre hay una pequeña parte del líquido residual que no se puede eliminar por completo cada vez, especialmente el dispositivo con el imán en la parte inferior. Debido a que el imán adsorbe las perlas magnéticas hasta el fondo, la pipeta no puede estar demasiado cerca del fondo, por lo que la solución de enjuague no puede eliminarse por completo. La eliminación, la sal residual y el etanol en la solución de enjuague afectarán la eficacia de elución posterior y la tasa de éxito de la PCR; el imán en el costado del dispositivo tendrá menos líquido residual, pero la eficiencia de elución no es buena, dependiendo del ADN para disolverse en el lavado. En la solución sin tampón, a menos que espere más de media hora, por lo que en unas 96 estaciones de trabajo de extracción automática de ácido nucleico, el tiempo de ciclo de extracción toma 150 minutos y el método de 32 imanes puede tomar 5 rondas al mismo tiempo. .

Hablemos del sistema de extracción de ácido nucleico con método de varilla magnética. El flujo suele tener 8, 16, 32, 96 canales. En comparación con el método de succión, la ventaja del método de varilla magnética es que el líquido en cada paso no se queda, porque la varilla magnética solo quita las perlas magnéticas y las transfiere. Vaya al pozo de reacción correspondiente en el siguiente paso. Además, el instrumento de extracción del método de varilla magnética debe ser más completo, como el calentamiento, y cada tanque de calentamiento debe tener una temperatura controlada de forma independiente, de modo que se pueda configurar el calentamiento, la lisis y la elución. Diferentes temperaturas, otro punto muy importante es que el motor que acciona la varilla magnética debe ser capaz de accionar la varilla magnética para mezclar y agitar rápidamente el líquido, a fin de facilitar la automatización y ayudar a la lisis y enjuague a fondo.

La selección de flujo del método de barra magnética es mejor elegir 32 canales. Los 96 canales parecen tener un flujo más alto, pero hay un problema muy práctico. Cuando se transfieren 96 barras magnéticas de una placa a otra, las barras magnéticas están en la parte superior. Qué hacer si el líquido cae a la mitad, goteará en otros orificios y causará contaminación, y la varilla magnética de 32 canales no atraviesa el cielo por encima de otras muestras, por lo que no habrá contaminación cruzada.

Lo anterior es la introducción relevante sobre la selección del sistema de extracción de ácidos nucleicos, pero muchas personas todavía son fáciles de caer en el malentendido de la selección. Los siguientes ejemplos ilustran los dos malentendidos más comunes:

Malentendido 1: La diferencia entre el sistema de extracción de ácido nucleico y la estación de trabajo y el malentendido de la selección

Muchos fabricantes de estaciones de trabajo a menudo les dicen a sus clientes cuando promocionan sus estaciones de trabajo que el sistema de extracción de ácidos nucleicos es completamente automático, mientras que el sistema de extracción de ácidos nucleicos es semiautomático. Los clientes también piensan subjetivamente que la estación de trabajo puede pipetear, extraer y hacer cualquier cosa, como si simplemente pusieran la muestra. Entra, puedes obtener el ácido nucleico que deseas sin preocuparte por nada. Cuando la estación de trabajo está en su lugar, resulta que la situación real no es así. No solo no es tan bueno como se esperaba, sino que incluso la extracción de ácido nucleico básico es difícil. Entonces, cual es la razon? ?

La primera pregunta es el problema de abrir la tapa. Las estructuras de la tapa de los tubos de extracción de sangre, los tubos de almacenamiento de saliva y los tubos de crioconservación de código bidimensional son diferentes, los tamaños son diferentes y los fabricantes son diferentes. ¿Cómo abrir la tapa automáticamente en la estación de trabajo? Este problema ya no está resuelto.

El segundo problema es la entrada de códigos de barras, códigos de barras y códigos QR, así como algunas etiquetas adheridas manualmente y etiquetas escritas a mano, por lo que el escaneo de códigos sigue siendo manual, lo cual es difícil de automatizar.

El tercer problema es que la adición de líquido está automatizada. La estación de trabajo puede agregar reactivos automáticamente, lo que parece ser una ventaja, pero se necesitan entre 15 y 30 minutos para agregar una placa de 96 pocillos profundos, y la extracción generalmente requiere seis reactivos, es decir, seis placas. Tarda aproximadamente 1,5 horas. Muchos reactivos de extracción contienen una alta concentración de etanol. Durante tanto tiempo, la concentración de etanol cambiará, lo que afectará la eficiencia y sensibilidad de la extracción. Además, muchos fabricantes de instrumentos de extracción tienen kits preinstalados que no es necesario agregar. líquido.

Malentendido 2: la diferencia entre productos importados y nacionales, este es el mayor malentendido de elección

Mucha gente elige un sistema de extracción de ácido nucleico basado en el pensamiento habitual y piensa que los importados son mejores que los nacionales; sin embargo, los extractores de ácidos nucleicos son equipos orientados a la aplicación, no equipos experimentales básicos, no el tipo de equipo que se puede utilizar cuando están conectados. La extracción de ácidos nucleicos requiere la cooperación general de instrumentos, kits de apoyo y programas de aplicación. Los fabricantes deben seleccionar los kits y procedimientos de extracción más adecuados según el tipo de muestra. A menudo es necesario optimizar los reactivos y los procedimientos. Sin el soporte técnico del fabricante, no puede usarlo. . Esto explica bien por qué muchas estaciones de trabajo e instrumentos de extracción importados no son utilizados colectivamente por nadie; el apoyo técnico de los instrumentos importados no puede mantenerse al día, y las visitas técnicas de los instrumentos importados requieren costosas tarifas de puerta a puerta, y no hay garantía de que puedan utilizarse. Ayude a los clientes a optimizar el plan experimental (por supuesto, se debe cobrar la tarifa de puerta a puerta).

En general, la mayoría de los sistemas de extracción de ácido nucleico no pueden mantenerse al día con los fabricantes nacionales en términos de conveniencia del sistema operativo de instrumentos, sensibilidad y rendimiento de extracción de instrumentos, kits de instrumentos, capacidades de personalización y actualización de instrumentos, etc., y los cargos por servicio posventa son uniformes. más frustrante. No es necesario demostrar la superioridad de las importaciones. A través de la discusión anterior, debemos tener claro que al elegir un sistema de extracción de ácidos nucleicos, lo mejor es realizar una investigación o prueba completa, para no caer en la situación pasiva de comprar un sistema de extracción de ácidos nucleicos.