¿Cómo mejorar la precisión de las pruebas de ácido nucleico COVID-19?
Con el repunte de la epidemia de COVID-19, la demanda de pruebas de ácido nucleico ha aumentado drásticamente. Sin embargo, la precisión de los resultados de las pruebas de ácidos nucleicos ha atraído una atención generalizada. La situación de «falta» ha provocado que algunos médicos y el público planteen preguntas sobre la calidad de los kits de prueba. duda. Entonces, ¿cuáles son los factores que pueden afectar la precisión actual de la detección de ácidos nucleicos? Como proveedor profesional de kits de extracción de ácido nucleico, Ascent compartió con nosotros cómo mejorar la precisión de la detección de ácido nucleico COVID-19 a partir de la recolección de muestras, el almacenamiento y transporte de muestras, la extracción de ácidos nucleicos y las pruebas de amplificación.
1. Recogida de muestras
El muestreo correcto es la clave del éxito del experimento. Se entiende que debido a la limitación de la maniobrabilidad, el método de muestreo más común es utilizar hisopos nasofaríngeos, esputo o líquido de lavado alveolar. El método más común es recolectar muestras de hisopos nasofaríngeos. Sin embargo, la técnica de muestreo del hisopo nasofaríngeo afectará la precisión de la prueba. Es mejor que una enfermera capacitada muestre al paciente. Es necesario recolectar suficientes células efectivas de la nasofaringe del paciente. Es posible que las enfermeras sin experiencia no puedan obtener muestras calificadas. .
Además, los hisopos nasofaríngeos y las soluciones de conservación utilizadas para la recolección de muestras también afectarán la calidad y conservación de las muestras recolectadas. Se recomienda utilizar hisopos flocados estériles que puedan absorber y liberar más muestras y libres de ADN libre. La solución de preservación celular de enzima y RNasa puede preservar mejor el ácido nucleico viral y evitar la degradación del ARN de COVID-19.
2. Almacenamiento y transporte de muestras
COVID-19 es un virus de ARN. Se debe prestar especial atención a la temperatura de almacenamiento y el período de tiempo correspondiente durante el almacenamiento y transporte de las muestras para evitar la degradación del ácido nucleico y falsos negativos. Las muestras deben enviarse para su inspección lo antes posible después de la recolección y enviarse al laboratorio dentro de las 2 a 4 horas posteriores a la recolección. Las muestras de sangre deben transportarse a temperatura ambiente y las demás muestras deben transportarse entre 2 ° C y 8 ° C; si el tiempo de transporte excede las 24 horas, las muestras deben almacenarse a -70 ° C o menos, y el transporte a corta distancia debe realizarse entre 2 ° C y 8 ° C. El transporte con hielo seco se utilizará para la transferencia a distancia. Evite la congelación y descongelación repetidas durante el transporte y almacenamiento de la muestra.
3. Extracción de ácidos nucleicos
Las pruebas de ácido nucleico tienen altos requisitos para los laboratorios, el equipo, el personal y los reactivos. Se necesitan particiones especiales de laboratorio de PCR para garantizar la precisión de los resultados de la prueba. La extracción de ácidos nucleicos es un paso crucial en la detección de ácidos nucleicos.
El kit actualmente aprobado solo contiene los reactivos de amplificación necesarios para la detección de ácido nucleico COVID-19 y no contiene reactivos de extracción de ácido nucleico. Puede haber diferencias en la eficiencia de extracción de diferentes reactivos de extracción de ácidos nucleicos o sistemas de extracción de ácidos nucleicos. Se recomienda utilizar métodos de extracción verificados y reactivos de extracción para la extracción de ácido nucleico para garantizar la precisión de los resultados de la prueba.
Para garantizar la seguridad de los inspectores y la pureza y eficiencia de la extracción de ácidos nucleicos, se puede utilizar un método automatizado de extracción de ácidos nucleicos basado en la adsorción de perlas magnéticas. Muchos laboratorios autorizados y expertos relacionados recomiendan utilizar un instrumento de extracción de ácido nucleico semiautomático de tamaño pequeño, colocarlo en un gabinete de seguridad biológica y completar todos los pasos de carga de muestras y extracción de ácido nucleico en el gabinete de seguridad, que es simple y eficiente. y protege la seguridad de los operadores.
4. Detección de amplificación
La detección de ácido nucleico de COVID-19 se dirige principalmente al marco de lectura abierto 1ab (ORF1ab), la proteína de la nucleocápside (N) y la proteína de la envoltura (E) del genoma de COVID-19. Para confirmar que un caso es positivo en el laboratorio, se cumplen las siguientes condiciones: tres objetivos (ORF1ab, N, E) resultados específicos de la prueba de RT-PCR fluorescente en tiempo real en la misma muestra son más de dos (incluidos dos) positivos. Si hay un resultado positivo de la prueba para un solo objetivo, se requiere volver a tomar una muestra y volver a realizar la prueba.
Los resultados negativos no pueden descartar nuevas infecciones por COVID-19. Es necesario descartar los factores que pueden producir falsos negativos, entre ellos: la mala calidad de las muestras, como las muestras respiratorias de la orofaringe y otras partes; especímenes recolectados demasiado pronto o demasiado tarde; almacenamiento y transporte inadecuados y procesamiento de muestras; las razones de la tecnología en sí, como la inhibición de la PCR, etc.
Debido a la grave propagación de la epidemia, el desarrollo de kits de detección de ácido nucleico COVID-19 y la aprobación de emergencia son urgentes. Es posible que no haya suficientes datos de verificación de muestras clínicas en la etapa inicial y existe el riesgo de una sensibilidad y una optimización de la especificidad insuficientes. El rendimiento del reactivo y la tasa de detección positiva de diferentes fabricantes son diferentes. La mayoría de los kits solo detectan los dos objetivos de ORF1ab y el gen N, y los resultados positivos de un solo objetivo de algunos reactivos representan más del 20% de los resultados positivos. Para los resultados positivos de un solo objetivo y los resultados sospechosos, se recomienda utilizar diferentes kits para su revisión o enviar a los CDC para su confirmación, pero aumentará la carga de trabajo y retrasará el tiempo de diagnóstico. De la información pública, los reactivos actualmente aprobados no contienen enzima UNG ni sistema anticontaminación dUTP, y existen riesgos de contaminación y falsos positivos.
