Cómo realizar la extracción de ácidos nucleicos
La dificultad común en la extracción de ácidos nucleicos radica en la dificultad de extraer ARN de alta calidad de algunos tejidos vegetales, que está relacionado con los ricos ingredientes en estos tejidos vegetales, como compuestos fenólicos, polisacáridos y algunos metabolitos secundarios no identificados. Además, hay tejidos que son ricos en mayor actividad. En una célula intacta, estas sustancias se separan de los ácidos nucleicos. Una vez que la célula se rompe, estas sustancias interactuarán con el ARN.
Método de extracción de ácidos nucleicos:
1. Desactive rápidamente la ARNasa endógena para evitar la degradación del ARN. Los siguientes 3 métodos pueden inactivar eficazmente la ARNasa endógena:
1) Recolecte la muestra con un lisado celular que contenga caotrópicos (como sal de guanidina) y homogeneice inmediatamente.
2) Congele instantáneamente la muestra con nitrógeno líquido. Vale la pena señalar que: los trozos de tejido deben ser lo suficientemente pequeños como para congelarse en el momento en que se sumergen en nitrógeno líquido para garantizar la inactivación instantánea de la RNasa.
3) Coloque inmediatamente la muestra en la solución de almacenamiento de muestras de ARN líquida sin nitrógeno. Es un reactivo de recolección acuoso, no tóxico que puede estabilizar y proteger inmediatamente el ARN en muestras de células y tejidos intactos y descongelados. El punto clave es que el corte de muestra de tejido debe ser lo suficientemente delgado (<0,5 cm) para que pueda penetrar rápidamente en el bloque de tejido antes de que la ARNasa destruya el ARN.
2. Utilice las condiciones correctas de almacenamiento de células o tejidos.
Después de que la muestra se congele instantáneamente con nitrógeno líquido, debe almacenarse a -80 ° C y no debe descongelarse. Incluso una descongelación breve antes de la homogeneización en un lisado que contiene sal de guanidina dará como resultado la degradación y pérdida de ARN. Los tejidos congelados instantáneamente deben triturarse en polvo a temperatura ultrabaja y luego colocarse en la solución de lisis para su homogeneización.
3. Elija un buen método de aislamiento de ARN
Los numerosos métodos de aislamiento de ARN disponibles pueden ser difíciles de elegir. El método actual simple y seguro es la separación de columnas. Por ejemplo, es amado por todos debido a su funcionamiento sencillo, poco tiempo y alta pureza. No requiere ADNasa para digerir el ADN, lo que ahorra tiempo y evita la degradación del ARN, aumentando así el rendimiento de la extracción de ácidos nucleicos; En relación con la separación sin columna, elimina las proteínas y otras impurezas de forma limpia, mejora la pureza y es muy adecuado para células, tejidos y plantas en general.
La extracción de ácidos nucleicos de plantas es más difícil de elegir. La extracción de ARN vegetal se ve afectada por el contenido de fenoles, polisacáridos, impurezas de proteínas y metabolitos secundarios. Puede elegir el kit de extracción de ARN total de plantas de polisacáridos y polifenoles (narciso, pimiento, zanahoria, maíz, lirio, trigo, tomates, coliflor, colza, etc.) y kits de extracción de ARN de plantas generales (adecuados para la extracción de la mayoría de plantas, incluyendo : manzana, uva, fresa, plátano, longan, lichi, planta de césped, pino, cedro, abedul blanco, piña de pino púrpura, coleo, flor de pascua, adelfa, Ficus benjamina, violeta, rosa, geranio, campanilla, etc.); Cabe mencionar que la sangre (incluyendo suero, plasma, líquido cefalorraquídeo, otros líquidos) extracción de ácido nucleico TRIZOL y glóbulos rojos El método de lisis no es efectivo. El lisado de glóbulos rojos no contiene inhibidores de RNasa. En este proceso, el ARN se degrada fácilmente. Se recomienda utilizar un kit de extracción de ARN total en sangre.
