¿Cuál es el proceso de la prueba de ácido nucleico COVID-19?

Recientemente, a medida que la cepa COVID-19 ha mutado, su toxicidad e infectividad se han vuelto más fuertes y la situación de la epidemia mundial se ha vuelto extremadamente grave. Para prevenir la propagación del virus, además de la prevención, es más importante controlar la fuente de infección. La prueba de ácido nucleico puede El virus que acecha en el cuerpo humano se detecta por primera vez. La prueba de ácido nucleico es para averiguar si hay ácidos nucleicos de virus extraños en las muestras respiratorias, la sangre o las heces de los pacientes para determinar si están infectados por COVID-19. Por lo tanto, una vez que la prueba es «positiva» para el ácido nucleico, puede probar que hay un virus en el cuerpo del paciente.

Después de que COVID-19 infecta el cuerpo humano, primero se reproducirá en el sistema respiratorio. Por lo tanto, el ácido nucleico del virus en el esputo y los hisopos nasofaríngeos se puede analizar para determinar si el cuerpo humano está infectado con el virus. Por lo tanto, una prueba de ácido nucleico positiva se puede utilizar como un nuevo estándar para el diagnóstico de la infección por COVID-19.

Principios de la detección de ácido nucleico COVID-19

El método más común para detectar la secuencia específica de COVID-19 es la PCR cuantitativa de fluorescencia (reacción en cadena de la polimerasa). Dado que la plantilla de la reacción de PCR es solo ADN, el ácido nucleico (ARN) de COVID-19 debe transcribirse de forma inversa en ADN antes de la reacción de PCR. En el sistema de reacción de PCR, se incluyen un par de cebadores específicos y una sonda Taqman. La sonda es una secuencia de oligonucleótidos específica con un fluoróforo indicador y un fluoróforo inhibidor marcados en ambos extremos. Cuando la sonda está completa, la señal fluorescente emitida por el grupo informador es absorbida por el grupo extintor; si hay una secuencia diana en el sistema de reacción, la sonda se une a la plantilla durante la reacción de PCR y la ADN polimerasa utiliza la actividad exonucleasa de la enzima para transferir la sonda a lo largo de la plantilla. Digestión y degradación enzimática, el grupo indicador se separa del grupo de extinción y emite fluorescencia. Cada vez que se amplifica una cadena de ADN, se produce una molécula fluorescente. El instrumento de PCR cuantitativa fluorescente puede controlar que el número de ciclos (valor Ct) en el que la fluorescencia alcanza el umbral preestablecido está relacionado con la concentración de ácido nucleico viral. Cuanto mayor sea la concentración de ácido nucleico viral, menor será el valor de Ct. Los productos de diferentes fabricantes determinarán el valor de juicio positivo de este producto en función del rendimiento de sus propios productos.

Proceso de detección de ácido nucleico COVID-19

Para la detección de ácido nucleico de COVID-19, primero de acuerdo con los requisitos de muestra de las instrucciones del kit de extracción de ácido nucleico, se recolectan algunas muestras. Los tipos de muestras convencionales incluyen hisopos de garganta, hisopos nasales, esputo, líquido de lavado bronquial, líquido de lavado alveolar, etc.

Una vez obtenida la muestra del paciente, la prueba debe realizarse lo antes posible. Si la muestra que debe transportarse no se puede analizar de inmediato, debe empaquetarse a baja temperatura de acuerdo con las instrucciones y enviarse a una agencia de pruebas especial para su análisis. Después de recibir la muestra, la institución de análisis deberá realizar la extracción de ácido nucleico en la muestra, y el reactivo de extracción de ácido nucleico deberá utilizar el kit de extracción de ácido nucleico especificado en el manual del producto aprobado.

El ARN viral debe transcribirse de forma inversa a ADNc primero y luego amplificarse y probarse. La amplificación y detección por PCR deben utilizar el instrumento de PCR cuantitativo fluorescente especificado en el manual del producto aprobado. El valor Ct de la muestra obtenida mediante PCR cuantitativa fluorescente se puede utilizar para determinar si la muestra del paciente contiene COVID-19.
En el proceso mencionado anteriormente, la recolección, almacenamiento y transporte de muestras, la extracción y detección de ácidos nucleicos de muestra y la interpretación de los resultados deben llevarse a cabo estrictamente de acuerdo con los requisitos de las instrucciones del kit.

«Falso positivo» y «falso negativo» en las pruebas de ácido nucleico

El «falso positivo» de la prueba de ácido nucleico significa que el paciente no ha sido infectado con el nuevo coronavirus, pero la prueba de ácido nucleico tiene un resultado positivo. También le hemos presentado cómo mejorar la precisión de la prueba de ácido nucleico COVID-19. La aparición de «falsos positivos» generalmente se debe a la contaminación cruzada entre las muestras o la contaminación del ácido nucleico del laboratorio durante las pruebas de laboratorio. En el nivel técnico, siempre que el laboratorio implemente estrictamente el trabajo de control de calidad, la aparición de «falsos positivos» puede evitarse de manera efectiva.

El «falso negativo» de la prueba de ácido nucleico significa que los síntomas clínicos del paciente, los resultados de las imágenes pulmonares e incluso los antecedentes epidemiológicos apoyan la nueva neumonía coronaria, pero el resultado de la prueba de ácido nucleico viral del paciente es «negativo» y el resultado de la prueba no coincide con el clínico.

Las causas habituales de los «falsos negativos» son:

(1) En la etapa inicial del virus que invade el cuerpo humano, la cantidad de virus en el cuerpo humano aún no ha alcanzado un nivel detectable. En diferentes períodos de incubación viral, síntomas leves y síntomas graves, la carga viral de diferentes partes del cuerpo humano (como nasofaringe, orofaringe, tráquea, bronquios y alvéolos) variará. Por lo tanto, diferentes tiempos de muestreo y ubicaciones de muestreo pueden resultar en una cantidad insuficiente de virus en las muestras recolectadas;

(2) Cualquier reactivo de prueba tiene su límite inferior de detección (es decir, sensibilidad). Si el virus en la muestra del paciente no alcanza el límite inferior de detección del reactivo utilizado, se producirá un falso negativo;

(3) El mal desempeño del equipo y el personal de laboratorio, la mala gestión de la calidad, etc. también producirán «falsos negativos»;

(4) El muestreo irregular, la ubicación de recolección inadecuada y la recolección atípica de muestras han dado como resultado muy pocas o ninguna célula infectada con virus en las muestras. Eso puede causar «falsos negativos».

Lo anterior es una introducción a los principios y procedimientos actuales de detección de ácido nucleico para COVID-19. Se espera que la fuente de infección pueda controlarse en la mayor medida posible mediante la detección de ácidos nucleicos y se pueda encontrar un método para suprimir el virus lo antes posible.