¿Cuáles son los factores que afectan la extracción de ácidos nucleicos mediante perlas magnéticas?

En los últimos dos años, a medida que la detección de patógenos se ha vuelto más popular, la detección de ácidos nucleicos de patógenos ha entrado gradualmente en el campo de visión de las personas y se ha convertido en el estándar de oro para la detección de patógenos. Ante grandes cantidades de muestras, los resultados de las pruebas deben emitirse en un período corto de tiempo, y las necesidades de las personas de métodos de prueba rápidos y eficientes son cada vez más urgentes. Como paso importante de la detección de ácidos nucleicos, la extracción de ácidos nucleicos también se enfrenta a los requisitos de rendimiento y alta eficiencia. La extracción automática de ácidos nucleicos (extracción de ácidos nucleicos con método de perlas magnéticas) se ha promovido y aplicado rápidamente debido a sus características rápidas, eficaces, fáciles de usar, seguras y no tóxicas, y se ha convertido en un estándar en los laboratorios. Sin embargo, durante el proceso de extracción, ciertos factores afectarán los resultados de la extracción y requerirán la atención del operador. El editor de Aisen ha recopilado el conocimiento relevante de los factores que afectan la extracción de ácido nucleico mediante el método de perlas magnéticas, y lo compartiremos con usted.

La extracción de ácidos nucleicos mediante el método de perlas magnéticas consta de etapas de lisis, lavado y elución. Los factores que afectan estos pasos también afectarán la eficiencia de extracción de perlas magnéticas. A continuación explicamos cada paso uno por uno.

Factores que afectan el paso de lisis

1. Composición de la solución de lisis

Para algunas muestras que son difíciles de lisar, la capacidad de lisis del lisado se puede mejorar aumentando la concentración de sal de guanidina y tensioactivo. Las sales de guanidina y los tensioactivos pueden promover la desnaturalización de las proteínas, destruir las membranas celulares, disociar los ácidos nucleicos y las proteínas y liberar más ácidos nucleicos.

2, temperatura y tiempo de pirólisis

Aumentar la temperatura y aumentar el tiempo de lisis puede hacer que la lisis celular sea más completa y obtenga más ácidos nucleicos. Necesita explorar la temperatura y el tiempo apropiados; una temperatura demasiado alta o un tiempo demasiado prolongado también pueden conducir a la fragmentación del ácido nucleico o la eficiencia de extracción reducida causada por la volatilización del alcohol.

3, capacidad de adsorción de perlas magnéticas

serie de extracción de perlas magnéticas Las perlas magnéticas son generalmente perlas magnéticas de silanol, y la capacidad de adsorción de las perlas magnéticas se ve afectada por el área de superficie específica de las perlas magnéticas y la densidad del grupo modificado. Generalmente, se seleccionan perlas magnéticas con grupos más modificados y una superficie específica mayor. Generalmente, cuanto menor es el diámetro de partícula de las perlas magnéticas, mayor es el área de superficie específica. Pero no es que cuanto menor sea el tamaño de partícula de las perlas magnéticas, mejor, cuanto menor sea el tamaño de partícula de las perlas magnéticas, la velocidad de adsorción también se ralentizará, puede elegir de acuerdo con la situación real de la muestra. El tampón de unión se combina generalmente con isopropanol o etanol. Generalmente, la capacidad de unión se puede mejorar aumentando la proporción de alcohol, y la concentración de sal caotrópica debe aumentarse para promover la unión de ácido nucleico y perlas magnéticas.

Factores que influyen en los pasos de lavado.

El lavado es muy importante para todo el paso de extracción. Está relacionado con la pureza del ácido nucleico, que afecta directamente a las aplicaciones de PCR posteriores. La amplitud de oscilación y el tiempo de mezcla de la barra magnética afectarán la eficacia del lavado.

1, amplitud de oscilación de varilla magnética

Si la amplitud de oscilación de la varilla magnética es demasiado pequeña, quedarán impurezas en las perlas magnéticas, lo que afectará la capacidad de las perlas magnéticas para adsorber ácidos nucleicos; si la oscilación es demasiado violenta, parte del ácido nucleico se perderá o el ácido nucleico se romperá o degradará y el rendimiento disminuirá.

2, tiempo de mezcla

Si el tiempo de mezcla es demasiado corto, quedarán impurezas en las perlas magnéticas, lo que afectará la capacidad de las perlas magnéticas para adsorber ácidos nucleicos; si el tiempo de mezcla es demasiado largo, parte del ácido nucleico se perderá o el ácido nucleico se romperá o degradará y el rendimiento disminuirá.

La influencia de los factores del paso de elución

El paso de elución afecta directamente el rendimiento de ácido nucleico. Los factores que afectan la eficacia de elución son el grado de secado de las perlas magnéticas y la temperatura y el tiempo de elución.

1. Grado de sequedad de las perlas magnéticas

Si las perlas magnéticas no se secan completamente, puede haber impurezas como el alcohol, que afectarán la reacción de PCR posterior; si las perlas magnéticas están demasiado secas, el ácido nucleico puede secarse en las perlas magnéticas, dando como resultado una disminución de la eficacia de elución.

2, temperatura y tiempo de elución

El aumento apropiado de la temperatura y el tiempo de elución ayudará a que el ácido nucleico se libere de las perlas magnéticas. Si el tiempo es demasiado largo o la temperatura es demasiado alta, el ácido nucleico puede degradarse y es necesario comprender el equilibrio.

El contenido relevante sobre los factores que afectan el método de extracción de ácido nucleico con perlas magnéticas es el anterior. Al realizar el método de extracción de ácido nucleico con perlas magnéticas, asegúrese de que los factores anteriores sean razonables, de modo que la calidad de la extracción pueda ser mejor. Aisen Biotechnology tiene una amplia experiencia en la producción de sistemas de extracción de ácidos nucleicos y kits de extracción de ácidos nucleicos. Utiliza tecnología de alta calidad y calidad confiable. Los clientes que lo necesiten pueden llamar para realizar consultas.