¿Cuáles son los métodos de extracción de ácidos nucleicos?

El principio de extracción de ácidos nucleicos garantiza, en primer lugar, la integridad de la estructura primaria del ácido nucleico y, en segundo lugar, elimina la contaminación de otras moléculas. Al extraer, se debe prestar atención a acortar el tiempo de extracción, reducir la degradación del ácido nucleico por factores químicos y físicos, fuerza de cizallamiento mecánico y alta temperatura, y prevenir la degradación biológica del ácido nucleico. ¿Cuáles son los métodos de extracción de ácidos nucleicos?

1.Método de sal concentrada
(1). Usando la diferente solubilidad de RNP y DNP en la solución electrolítica para separar los dos, el método común es extraer el moco de DNP obtenido extrayendo cloruro de sodio con cloruro de sodio 1M y agitando junto con cloroformo que contiene una pequeña cantidad de octanol para hacer la emulsificación. y centrifugación para eliminar la proteína. En este momento, el gel de proteína permanece entre la fase de agua y la fase de cloroformo, mientras que el ADN está en la fase de agua superior. La sal sódica del ADN se puede precipitar con 2 veces el volumen de etanol al 95%.

(2). También puede usar 0.15 M NaCL para lavar repetidamente la solución de trituración celular para eliminar el RNP, luego extraer la desoxirribonucleína con 1 M NaCL y luego eliminar la proteína mediante el método del cloroformo — isoalcohol. Comparando estos dos métodos, el segundo método puede reducir la degradación del ácido nucleico.

(3). Cuando se extrae ADN con una solución diluida de ácido clorhídrico, agregar una cantidad adecuada de detergente, como SDS, puede ayudar a separar las proteínas y el ADN. En el proceso de extracción, para inhibir la degradación del ADN por la DNasa en el tejido, se agregó citrato de sodio a la solución de cloruro de sodio como agente de fusión de iones metálicos, generalmente NaCL 15 M, citrato de sodio 0.015 M, y se llama solución SSC, para extraer ADN.

2.Método de detergente aniónico
Los detergentes como el SDS o el xilato de sodio se utilizan para desnaturalizar las proteínas y el ADN se puede extraer directamente de los materiales biológicos. Debido a que el ADN y las proteínas en las células a menudo se combinan por atracción electrostática o enlaces de coordinación, los detergentes aniónicos pueden destruirlos. Una especie de enlace de valencia, por lo que los detergentes aniónicos se utilizan a menudo para extraer ADN.

3.Método de extracción de fenol
El fenol actúa como desnaturalizante de proteínas y al mismo tiempo inhibe la degradación de la ADNasa. Cuando el homogeneizado se trata con fenol, el enlace entre la proteína y el ADN se rompe y la superficie de la molécula de proteína contiene muchos grupos polares que son compatibles con el fenol, y la molécula de proteína es soluble en fenol. Fase, mientras que el ADN es soluble en la fase acuosa. Después de la centrifugación y la estratificación, retire la capa de agua, repita la operación varias veces y luego combine la fase acuosa que contiene ADN y use la propiedad insoluble en alcohol del ácido nucleico para precipitar el ADN con etanol. En este momento, el ADN es una sustancia muy viscosa y se puede extraer envolviéndolo en una bola con vidrio. La característica de este método es mantener el ADN extraído en su estado natural.

4. método de extracción de agua
Utilizando la naturaleza del ácido nucleico para disolverse en agua, después de romper las células de los tejidos, elimine el ARN con una solución baja en sal y disuelva el precipitado en agua para disolver completamente el ADN en agua. Después de la centrifugación, recoja el sobrenadante y agregue cloruro de sodio sólido al sobrenadante. A 2,6 M, agregue 2 veces el volumen de etanol al 95%, agite inmediatamente y luego lave con etanol y acetona al 66%, 80% y 95%, respectivamente.

Lo anterior da una breve introducción a cuáles son los métodos de extracción de ácidos nucleicos. Ascend ofrece servicios de fundición profesionales y completos para productos de extracción de ácidos nucleicos.