Método de perlas magnéticas de pasos y principios de extracción de ácido nucleico

Con el continuo desarrollo de la biomedicina, también se está actualizando la tecnología de extracción de ácidos nucleicos. La extracción de ácidos nucleicos con perlas magnéticas, como un nuevo tipo de tecnología de extracción de ácidos nucleicos, puede extraer ácidos nucleicos con alto rendimiento y automatización, satisfaciendo las necesidades de la biotecnología actual. Además, los pasos del método de perlas magnéticas para la extracción de ácidos nucleicos son relativamente simples, fáciles de operar y son bien recibidos. A continuación, compartiré con ustedes los pasos y principios del método de perlas magnéticas para la extracción de ácidos nucleicos.

Método de perlas magnéticas para los pasos de extracción de ácidos nucleicos

1. Agregue 1 mL de agua desionizada a cada botella de 40 mg de polvo seco de proteinasa K hasta una concentración final de 40 mg / mL y agregue 500 μL de agua desionizada a cada botella de 20 mg de polvo seco de proteinasa K hasta una concentración final de 40 mg / mL. y mézclelo al revés. Se puede disolver completamente una vez y se puede almacenar a 4 ℃ para uso a corto plazo. Manténgalo a -20 ℃ para almacenamiento a largo plazo. La congelación y descongelación repetidas no debe exceder de cinco veces.

2. La muestra de tejido se muele hasta obtener un polvo fino con 10-30 mg de nitrógeno líquido, se transfiere a un tubo de centrífuga de 1,5 ml, se resuspende en 200 μL de tampón 1 X PBS y luego se pasa al siguiente paso. La muestra líquida pasa directamente al siguiente paso.

3. Tome 500 μL de lisado de virus VL y agréguelo a un tubo de centrífuga sin enzimas de 1,5 ml, luego agregue 25 μL de proteinasa K y 25 μL de perlas magnéticas virales (agite bien antes de agregar), y luego agregue 200 μL de suero / plasma / tejido homogeneizar la muestra, agitar y mezclar bien, baño maría al 55% C durante 20 minutos, invertir y mezclar durante 10 segundos cada 5 minutos.

4. Saque el tubo de centrífuga sin enzimas en el baño de agua, colóquelo en el soporte magnético y magnetice durante 90 segundos para absorber completamente las perlas magnéticas. Utilice una pipeta para aspirar y desechar con cuidado el sobrenadante (tenga cuidado de no atraer las perlas magnéticas en la parte inferior del tubo).

5. Retire el tubo de centrífuga del soporte magnético, agregue 700μL de solución de enjuague BufferA, mezcle pipeteando o agitando durante 30 segundos para resuspender las perlas magnéticas, luego coloque el tubo de centrífuga en el soporte magnético y magnetice durante 90 S para hacer las perlas Adsorbido por completo, aspirar con cuidado y desechar el sobrenadante con una pipeta.

6. Tome 700μL de solución de enjuague BufferB, agréguelo al tubo de centrífuga, trate de no soplar las perlas magnéticas y luego aspire y deseche directamente el sobrenadante.

7. Agregue 80μL de tampón de elución, retire el tubo de centrífuga y báñese en un baño de agua a 56 ° C durante 5 min. Durante este período, agite en vórtex 3-4 veces para eluir el ácido nucleico de las perlas magnéticas.

8. Coloque el tubo de centrífuga en el soporte magnético y atraiga magnéticamente durante 60 segundos, transfiera el líquido a un nuevo tubo de centrífuga sin enzimas de 1,5 ml y proceda directamente al experimento posterior o almacénelo a -20 ° C.

El principio del método de perlas magnéticas para la extracción de ácidos nucleicos.

Su principio se basa principalmente en la interacción electrostática, la interacción hidrófoba y la interacción de puentes de hidrógeno. El ADN / ARN de la célula o tejido se libera bajo la acción del lisado. En este momento, las perlas nanomagnéticas de sílice superparamagnéticas modificadas en la superficie «se unen específicamente» con el ácido nucleico para formar un «complejo ácido nucleico-perlas magnéticas». Luego, bajo la acción de un campo magnético externo, el complejo se separa. Luego, el eluido se usa para eliminar las impurezas adsorbidas de manera no específica, desalar y purificar para obtener la sustancia de ácido nucleico que se va a extraer.