核酸提取方法有哪些?

核酸提取的原理首先保证了核酸一级结构的完整性,其次消除了其他分子的污染。提取时,应注意缩短提取时间,减少化学和物理因素,机械剪切力和高温引起的核酸降解,并防止核酸的生物降解。核酸提取的方法有哪些?

1.浓盐法
(1)利用RNP和DNP在电解液中的不同溶解度来分离两者,常用的方法是提取DNP粘液,方法是用1M氯化钠萃取氯化钠,然后与含有少量辛醇的氯仿一起振摇,从而制得乳化液。并离心去除蛋白质。此时,蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相之间,而DNA在上层水相中。 DNA的钠盐可用体积为95%乙醇的2倍沉淀。

(2)您也可以使用0.15 M NaCL反复洗涤细胞破碎溶液以去除RNP,然后用1 M NaCL提取脱氧核糖核酸,然后通过氯仿-异醇法去除蛋白质。比较这两种方法,第二种方法可以减少核酸降解。

(3)用稀盐酸溶液提取DNA时,添加适量的去污剂(如SDS)可以帮助分离蛋白质和DNA。在提取过程中,为了抑制组织中DNase对DNA的降解,将柠檬酸钠添加到氯化钠溶液中作为金属离子的熔化剂,通常是15M NaCL,0.015M柠檬酸钠,称为SSC溶液,提取DNA。

2.阴离子去污剂法
诸如SDS或木酸钠的洗涤剂可用于使蛋白质变性,并且可以直接从生物材料中提取DNA。由于细胞中的DNA和蛋白质通常通过静电吸引或配位键结合在一起,因此阴离子去污剂可以破坏这种情况。价键的一种,因此阴离子去污剂通常用于提取DNA。

3.苯酚提取方法
苯酚充当蛋白质变性剂,同时抑制DNase的降解。当用酚处理匀浆时,蛋白质和DNA之间的键断裂,蛋白质分子的表面含有许多与酚相容的极性基团,蛋白质分子可溶于苯酚。相,而DNA可溶于水相。离心和分层后,取出水层,重复几次操作,然后合并含DNA的水相,并利用核酸的不溶于醇的性质用乙醇沉淀DNA。此时,DNA是一种非常粘稠的物质,可以通过将其包裹在玻璃球中而将其取出。该方法的特点是使提取的DNA保持其自然状态。

4.水的提取方法
利用核酸的性质将其溶解在水中,然后破坏组织细胞,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀物溶解在水中,从而将DNA完全溶解在水中。离心后,收集上清液,并向上清液中添加固体氯化钠。至2.6M,加入2倍体积的95%乙醇,立即搅拌,然后分别用66%,80%和95%乙醇和丙酮洗涤。

上面简要介绍了核酸提取的方法, Ascend为核酸提取产品提供专业和完整的铸造服务。