核酸的分离纯化方法

核酸是遗传信息的重要载体和重要的生物信息分子。它在人们的生物学研究过程中起着关键作用。目前，有许多分离和纯化核酸的方法。最常用的是（异）胍硫氰酸盐。什么是苯酚-氯仿的一步法，下面简要介绍该方法。

由于RNase的影响，为了获得完整的RNA分子，有必要在核酸分离和纯化的初始阶段尽快使细胞内RNase的活性失活。在β-巯基乙醇的协同作用下，高浓度（异）胍硫氰酸盐可以极快地抑制RNase的活性，并可以从胰腺和其他富含RNase的组织细胞中分离出完整的RNA分子，现已成为一种常规方法。用过的试剂。对于含量较低的样品，添加糖原可以提高RNA的回收率。一步法最常用于总RNA提取。

1，（异）胍硫氰酸胍和氯仿一步法
（异）胍硫氰酸酯-苯酚氯仿法是一种经典的一步法，由Chomczynski和Sacchi在1987年提出。它用含有4mmol / L异硫氰酸胍和0.1mmol / Lβ-巯基乙醇，然后在pH 4.0的酸性条件下用苯酚/氯仿萃取裂解液，最后通过用异丙醇沉淀并用75％乙醇洗涤来制备RNA。与以前的（异）胍硫氰酸异氰酸酯-CsCl超速离心法相比，该方法简单，经济，高效，可同时处理多个。标本以及RNA的完整性和纯度都很高。它仍然用于从培养的细胞和大多数动物组织中分离和纯化核酸。

总RNA的产量取决于样品的初始量。每毫克组织的总RNA产量约为4-7 g，每106个细胞约为5-10 g。但是，该方法不适用于从富含甘油三酸酯的脂肪组织中提取RNA，有时RNA会被多糖和蛋白聚糖污染。这些污染物将影响乙醇沉淀后RNA的溶解，同时抑制RT-PCR反应。它通过与膜结合而影响RNA杂交中的印迹步骤。脂肪组织RNA的提取可以用（异）胍硫氰酸氰酸盐-CsC1超速离心方法代替。当多糖和蛋白聚糖的污染严重时，可以通过添加有机溶剂提取步骤并更改RNA沉淀条件来消除下一种方法。

2，可同时制备RNA，DNA和蛋白质的一步法
该方法是（异）胍硫氰酸氰酸酯-苯酚氯仿一步法的改进方法。它使用（异）胍硫氰酸氰酸酯-酚单相裂解试剂裂解细胞，然后添加氯仿以形成两相。变性的DNA和蛋白质位于两相的界面，保留在上层水相中的RNA是通过异丙醇沉淀和在RNA沉淀溶液中75％Z醇洗涤而制备的。 RNA沉淀溶液的组成为1.2mmol / L的NaCl和0.8mmol / L的柠檬酸二钠。

由于使用了RNA沉淀溶液，用这种方法制备的RNA样品很少被多糖和蛋白聚糖污染，可用于mRNA纯化，Northern杂交，逆转录和RT-PCR反应。界面处的DNA和蛋白质可以分别被乙醇和异丙醇沉淀。通过这种方法制备的DNA大小约为20 kb，可以用作PCR反应的模板，而蛋白质样品主要用于蛋白质印迹。目前，该方法有多种可商购的单相裂解试剂可供选择。它是最常用的总RNA提取方法，其收率等同于异氰酸异硫氰酸胍-苯酚氯仿一步法。

3，其他方法
核酸的分离和纯化有很多，例如LiC1-脲法，（异）胍硫氰酸氰酸酯-CsCl超速离心法，热酚法，盐酸胍-有机溶剂法等，由于各种原因现在很少使用。

目前，Ascend已形成涵盖多种生物样品的专业核酸自动纯化程序。