核酸提取系统质量问题有哪些?

由于一个完整的PCR检测,需要核酸制备和PCR扩增“两道工序”,因此没有完全意义上的全自动核酸检测系统。随着核酸提取系统自动化和智能化的提高,仪器核酸制备方法逐渐应用于临床检测过程,甚有代替人工的趋势,但仪器核酸制备也有其缺陷和不足,这需要使用者对关键环节有清晰的认识,制定相应的对策,这对全面提升检测质量有重要帮助。

1. 样本进样感应功能对质量的影响

在自动进样核酸提取系统中,虽然有的系统有较好的样本进样监控功能,样本进样的准确性较高,但有些核酸提取系统使用了没有感应功能的吸头,或使用的感应吸头存在质量差异,有时出现感应失灵导致进样不足或无进样的情况,这在使用深孔板进行核酸制备的系统尤应引起重视,需要用户加强仪器的维护和保养,使仪器持续保持在正常运行状态。此外,还应持续跟踪检测结果,一旦发现不准确结果的反馈信息,应及时查找原因。如果是手工进样后再采用仪器进行核酸制备,将不存在这一问题。

2. 仪器机械操作精准度差异

在机械臂移动和抓取方面,不同核酸提取系统的精准度差异很大,对智能化程度较高的自动核酸提取系统,在机械臂发生操作故障时,有即刻停工报警功能,虽然影响工作进程,但不影响检测质量。但也有的仪器没有机械臂故障感应和报警功能,如有的核酸提取系统能将深孔板带走而继续工作,这类仪器需要在实验人员的监控下进行核酸制备,以便及时发现问题。因此“仪器自动化”并非“人工智能化”,人的职责不能忽视,否则很难获得持续的高质量结果

HERO 32 Magnetic Bead Method Nucleic Acid Extraction System

3. 仪器核酸制备的污染来源

长期实践经验证明,自然蒸发的气溶胶并不是PCR检测污染的主要原因,而携带交叉污染才是元凶!即使采用SPU单元进行核酸制备的COBAS,也无法避免由于气泡破裂导致的交叉污染,只是概率较低。而采用96深孔板进行核酸制备的仪器,由于近距离孔间的动力、加热、洗脱等环节,很难避免交叉污染。因此,仪器核酸制备的实验室污染监控十分必要!特别是传染病专科医院,其样本大都来自核酸阳性患者。设置多个阴性对照是监控必须,但这在临床工作中较难实现,因为成本太高而且麻烦。

4. 磁珠移动和洗脱差异带来的质量问题

仪器自动化虽然有其规范性和一致性,但由于不同样本存在质地差异,如干扰物质、杂质、纤维丝等,这些物质都会对核酸吸附和核酸洗脱质量产生影响,虽然试剂盒本身具有抵抗这些干扰的功能,但核酸提取系统难免存在磁珠移动、吸附和核酸洗脱的孔间差异,特别是只使用不维护的核酸提取系统。因此,对仪器进行定期而全面的维护和保养,是保证检测均一性的关键。